HiMedia KBM001-20KT Биохимический набор для подвижности E. coli HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM001-20KT HiMotility для идентификации и дифференциации Escherichia coli включает стандартизированную цветометрическую систему из 12 лунок. Набор предназначен для анализа чистых культур, выделенных из пищевых продуктов, фекалий, воды и клинических образцов, при инкубации 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Назначение

KBM001 применяют для идентификации и дифференциации Escherichia coli, скрининга патогенных микроорганизмов и подтверждения принадлежности известных лабораторных штаммов. Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами: перед анализом микроорганизм необходимо выделить и очистить, для исследования используют только чистые культуры.

Escherichia coli — грамотрицательные коккобациллярные палочки, ферментирующие лактозу; микроорганизмы этого вида часто выделяют из пищевых продуктов, фекалий, воды и других клинически значимых образцов. Полный перечень микроорганизмов, идентифицируемых системой, приведён в индексе идентификации.

Принцип измерения

KBM001 представляет собой стандартизированную цветометрическую систему идентификации на основе семи традиционных биохимических тестов, включая определение подвижности и четыре теста утилизации углеводов. Методики основаны на изменении pH и утилизации субстрата.

При инкубации метаболические изменения E. coli вызывают самопроизвольное изменение цвета питательной среды. Реакции интерпретируют визуально либо после добавления соответствующего реагента.

Состав набора

• Материала каждого набора достаточно для выполнения 10 тестов.
• 10 наборов KBM001.
• Техническая инструкция.
• Таблица интерпретации результатов.
• Лист регистрации результатов.
• Реагент Ковача R008 для теста на индол.
• Сульфаниловая кислота 0,8 % R015 для теста на восстановление нитратов.
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина R009 для теста на восстановление нитратов.

Подготовка посевного материала

1. Выделите исследуемый микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре M001, либо на дифференциальной среде, например на агаре МакКонки M082.
2. Отберите одну хорошо изолированную колонию.
3. Инокулируйте 5 мл бульона с мозговой и сердечной вытяжкой и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности посевного материала не менее 0,10D при 620 нм или соответствия стандарту 0,5 Мак-Фарланда.
4. В качестве альтернативы приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
5. Отрегулируйте плотность суспензии до 0,10D при 620 нм или до соответствия стандарту 0,5 Мак-Фарланда.

Требования к посевному материалу

• Ошибочные ложноотрицательные результаты возможны при мутности посевного материала менее 0,1 OD.
• Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры, а не суспензии.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Оставшиеся лунки с номерами 3–12 инокулируйте отдельными уколами петлёй с посевным материалом, не включая лунку 2.
6. Посевной материал должен достигать дна каждой лунки.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с таблицей интерпретации результатов.

Подвижность: лунки 1 и 2

Подвижность выявляют по перемещению сине-зелёного роста из первой лунки во вторую.

Тест на индол: лунка 3

1. Добавьте 1–2 капли реагента Ковача R008.
2. Появление красновато-розового окрашивания в течение 10 с указывает на положительную реакцию.
3. При отрицательной реакции реагент остаётся бледно окрашенным.

Тест на восстановление нитратов: лунка 6

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015.
2. Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина R009.
3. Немедленное появление розово-красного окрашивания после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.

Индекс идентификации видов Escherichia

Индекс основан на доле штаммов, демонстрирующих соответствующие реакции; обозначения присвоены по результатам лабораторных исследований и стандартным справочным данным.

• + — положительная реакция, более 90 % штаммов.
• - — отрицательная реакция, более 90 % штаммов.
• V — вариабельная реакция, 11–89 % штаммов.

Таблица интерпретации результатов

Ограничения интерпретации

1. В тесте ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут демонстрировать слабую реакцию. В таком случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию до 48 ч. Оранжевое окрашивание после 48 ч инкубации интерпретируют как отрицательную реакцию.
2. Для теста утилизации лизина может потребоваться инкубация до 48 ч.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты из-за мутаций либо из-за особенностей среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных справочных данных и результатов тестов, полученных в лаборатории.

Меры предосторожности

• Клинические образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные и обращаться с ними с соблюдением соответствующих требований биологической безопасности.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо поддерживать асептические условия.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы, а также инструменты, применявшиеся для выделения и инокуляции, включая пипетки и петли, необходимо обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством. После дезинфекции материалы утилизируют сжиганием или авток