HiMedia KBM001-20KT Биохимический набор для подвижности E. coli HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор для подвижности E. coli HiMotility (KBM001-20KT) производства HiMedia для идентификации и дифференциации бактерий вида Escherichia coli. Система предназначена для скрининга патогенных организмов и валидации лабораторных штаммов с использованием семи биохимических тестов.

Принцип работы

Набор KBM001 представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации. В её основу входят семь традиционных биохимических тестов, включая тест на подвижность и четыре теста на утилизацию углеводов. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании субстратов: при инкубации E. coli вызывают метаболические изменения, которые проявляются в виде спонтанного изменения цвета среды. Результаты интерпретируются визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор используется для идентификации Escherichia coli — грамотрицательных лактозоферментирующих коккобациллярных палочек, которые часто выделяют из пищевых продуктов, фекалий, воды и других клинических образцов.

Комплект поставки

• 10 наборов KBM001 (всего материал для проведения 100 тестов).
• Техническая вставка к продукту.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.
• Реагент Ковача (R008) для теста на индол.
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на восстановление нитратов.
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламин (R009) для теста на восстановление нитратов.

Методика проведения анализа

1. Подготовка инокулята

Набор KBM001 нельзя использовать непосредственно для клинических образцов; организмы должны быть предварительно изолированы и очищены. Используются только чистые культуры.

1. Изолируйте организм на общей среде, например, питательном агаре (M001), или дифференциальной среде, такой как агар МакКонки (M082).
2. Перенесите одну хорошо изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (Brain Heart Infusion) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\approx$ 0,10D при 620 нм или стандарта 0,5 по МакФарланду.
3. В качестве альтернативы можно использовать гомогенную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора, доведенную до плотности 0,10D при 620 нм или 0,5 по МакФарланду.

Примечание: если мутность инокулята ниже 0,1 OD, возможны ошибочные ложноотрицательные результаты. Использование обогащенной культуры вместо суспензии дает более выраженные результаты.

2. Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку засевать нельзя.
3. Засейте остальные лунки (№ 3–12), внося петлей с инокулятом в каждую лунку до достижения дна.

3. Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Особенности отдельных тестов

• Подвижность (лунка № 1): оценивается по перемещению голубовато-зеленого роста из 1-й лунки во 2-ю.
• Тест на индол (лунка № 3): добавьте 1–2 капли реагента Ковача (R008). Появление красновато-розового цвета в течение 10 секунд указывает на положительную реакцию. При отрицательном результате реагент остается бесцветным.
• Тест на восстановление нитратов (лунка № 6): добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Немедленное появление розово-красного цвета свидетельствует о положительной реакции.

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации различных видов Escherichia

Условные обозначения:

• + = Положительная реакция (более 90 % штаммов)
• - = Отрицательная реакция (более 90 % штаммов)
• V = Вариабельный результат (11–89 % штаммов)

Важные примечания по интерпретации

1. В тестах на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае зафиксируйте результат как «+» и продлите инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет после 48 часов считается отрицательным результатом.
2. Для теста на утилизацию лизина может потребоваться инкубация до 48 часов.
3. Возможны противоречивые результаты из-за мутаций или особенностей сред, использованных для изоляции и культивирования.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при получении: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.

Меры предосторожности и утилизация

• Клинические образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо строго соблюдать асептические условия.
• После использования наборы и инструменты (пипетки, петли и т. п.) должны быть дезинфицированы подходящим средством, а затем утилизированы путем сжигания или автоклавирования в одноразовых пакетах.