HiMedia KB019-5KT Набор для идентификации неферментирующих бактерий Hi24 (5 наборов)

Набор для идентификации неферментирующих бактерий HiMedia KB019-5KT Hi24 (5 наборов) производства HiMedia — стандартизированная цветометрическая система с 12 традиционными биохимическими и 12 тестами утилизации углеводов. Набор предназначен для идентификации неферментирующих грамотрицательных неспорообразующих бактерий в клинических образцах после выделения и очистки культуры, при этом прямое исследование клинических образцов не допускается.

Назначение и область применения

HiMedia KB019-5KT применяется для скрининга патогенных микроорганизмов из мочи, энтерических образцов и других соответствующих клинических материалов, а также для подтверждения известных лабораторных штаммов.

Идентифицируемые группы микроорганизмов включают роды Acinetobacter, Bordetella, Burkholderia, Legionella, Moraxella, Pseudomonas и Stenotrophomonas. Полный перечень микроорганизмов, идентифицируемых системой, приведён в идентификационном индексе, входящем в комплект.

Принцип идентификации

Набор использует стандартизированную цветометрическую систему идентификации, включающую:

• 12 традиционных биохимических тестов;
• 12 тестов утилизации углеводов.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются изменением окраски среды. Результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента.

Типы образцов

Исследуемые клинические образцы:

• кровь;
• моча;
• фекалии;
• энтерические образцы;
• образцы, связанные с внутрибольничными инфекциями;
• другие соответствующие клинические образцы.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов необходимо применять соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, предварительно выделяют и очищают; используют только чистые культуры.

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на стандартной питательной среде, например на питательном агаре Nutrient Agar (M001/M1274) или агаре с мозгово-сердечной вытяжкой Brain Heart Infusion Agar (M211).
2. Отберите одну хорошо изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона с мозгово-сердечной вытяжкой Brain Heart Infusion Broth и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по Мак-Фарланду.
3. В качестве альтернативы для инокуляции можно использовать однородную суспензию, приготовленную в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
4. Плотность суспензии необходимо скорректировать до 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по Мак-Фарланду.

При мутности инокулята менее 0,1 OD возможны ошибочные ложноотрицательные результаты. Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры вместо суспензии.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор асептически.
2. Снимите герметизирующую ленту.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностной инокуляции.
4. В качестве альтернативы набор можно инокулировать прокалыванием каждой отдельной лунки петлёй с инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в таблице интерпретации результатов.

Добавление реагентов в лунки № 1, 5, 8 и 12 выполняют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч. Перед использованием после извлечения из холодильника реагенты необходимо выдержать до достижения комнатной температуры.

Тест на индол — лунка № 1

1. Добавьте 1–2 капли реагента Ковача (R008).
2. Появление красновато-розовой окраски в течение 10 с указывает на положительную реакцию.
3. При отрицательной реакции реагент остаётся бледно окрашенным.

Тест на восстановление нитрата — лунка № 5

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
2. Добавьте 1–2 капли раствора альфа-нафтиламина (R009).
3. Немедленное появление розово-красной окраски после добавления реагента указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Тест на дезаминирование фенилаланина — лунка № 8

1. Добавьте 2–3 капли реагента TDA.
2. Появление тёмно-зелёной окраски в течение 1 мин указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Оксидазный тест — лунка № 12

1. Добавьте 1–2 капли реагента Гордона—Мак-Леода.
2. Появление пурпурно-синей окраски в течение 5–10 с указывает на положительную реакцию.
3. Допускается регистрировать замедленную положительную реакцию, возникающую в течение 60 с.
4. Отсутствие изменения окраски или появление положительной реакции позднее 60 с указывает на отрицательную реакцию.

Ограничения метода

• Набор KB019 нельзя использовать непосредственно для исследования клинических образцов; микроорганизмы должны быть предварительно выделены и очищены.
• Для анализа используют только чистые культуры.
• При выполнении теста ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В этом случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию до 48 ч.
• Иногда микроорганизмы дают противоречивый результат вследствие мутации либо из-за особенностей среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
• Идентификационный индекс составлен на основании стандартных справочных данных и результатов тестов, полученных в лаборатории.

Технические характеристики

• Тип изделия: питательная среда / система идентификации микроорганизмов
• Модель: KB019
• Наименование системы: Hi24™ Nonfermenters Identification Kit
• Количество традиционных биохимических тестов: 12
• Количество тестов утилизации углеводов: 12
• Количество тестов в одном наборе: 10
• Температура инкубации: 35–37 °C
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч
• Объём инокулята на лунку: 50 мкл
• Контроль мутности инокулята: 0,1 OD при 620 нм или стандарт 0,5 по Мак-Фарланду
• Условия хранения при получении: 2–8 °C
• Срок годности: 12 месяцев
• Назначение: идентификация неферментирующих бактерий
• Тип образца: клинический образец после предварительного выделения и очистки культуры
• Применение: диагностика in vitro

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Состав комплекта

Каждый набор содержит материалы для выполнения 10 тестов:

• 10 тест-полосок KB019;
• техническая инструкция к продукту;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов;
• идентификационный индекс.

Хранение и срок годности

• Температура хранения при получении: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Для сохранения рабочих характеристик продукт следует использовать до указанной даты истечения срока годности.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Перед вскрытием набора ознакомьтесь с маркировкой.
• Клинические образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные и обращаться с ними соответствующим образом.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо соблюдать асептические условия.
• Не допускайте контакта реагентов с кожей, глазами и одеждой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с клиническими образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в паспортах безопасности реагентов.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы и материалы, применявшиеся для выделения и инокуляции культуры, включая пипетки и петли, необходимо обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством, затем утилизировать сжиганием или автоклавированием в одноразовом пакете.

Идентификационный индекс

Положительные и отрицательные реакции для указанных микроорганизмов приведены в таблице. Пустая ячейка означает, что реакция для соответствующего теста не указана.