HiMedia KB019-20KT Набор для идентификации неферментирующих бактерий Hi24 (20 наборов)

Набор для идентификации неферментирующих бактерий Hi24 HiMedia KB019-20KT (20 наборов) представляет собой комплексную колориметрическую систему для определения грамположительных неспорообразующих микроорганизмов. Применяется для скрининга патогенов в образцах мочи, кишечных выделениях и других клинических материалах; включает 12 биохимических и 12 углеводных тестов.

Область применения

Система предназначена для идентификации неферментирующих бактерий, выделенных из клинических образцов (кровь, моча, фекалии, кишечные выделения, нозокомические пробы и др.). Набор позволяет определять микроорганизмы следующих родов:

• Acinetobacter
• Bordetella
• Burkholderia
• Legionella
• Moraxella
• Pseudomonas
• Stenotrophomonas

Также система может быть использована для валидации известных лабораторных штаммов. Полный перечень идентифицируемых организмов приведен в индексе идентификации, входящем в комплект.

Принцип измерения

Идентификация основана на использовании двенадцати стандартных биохимических тестов и двенадцати тестов на утилизацию углеводов. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании субстратов. В процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются в виде изменения цвета среды. Результаты интерпретируются визуально или после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте определяемый микроорганизм на стандартной среде, такой как питательный агар (Nutrient Agar M001/M1274) или агар инфузии мозга и сердца (Brain Heart Infusion Agar M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона инфузии мозга и сердца.
3. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по Макфарланду.
4. В качестве альтернативы можно использовать гомогенную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора, доведенную до плотности 0,1 OD при 620 нм или 0,5 по Макфарланду.

Примечание: при мутности инокулята ниже 0,1 OD возможны ложноотрицательные результаты. Использование обогащенной культуры вместо суспензии обеспечивает более выраженные результаты.

Инокуляция набора

1. В асептических условиях откройте набор и снимите защитную ленту.
2. Внесите по 50 мкл подготовленного инокулята в каждую лунку методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева петлей (внесение инокулята в каждую лунку путем прокалывания).

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно таблице интерпретации. В лунки № 1, 5, 8 и 12 реагенты добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Специфика тестов с добавлением реагентов

• Тест на индол (лунка № 1): добавить 1–2 капли реагента Ковача (R008). Появление красно-розового окрашивания в течение 10 секунд свидетельствует о положительной реакции. Отсутствие окрашивания — отрицательная реакция.
• Тест на восстановление нитратов (лунка № 5): добавить 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли раствора $\alpha$-нафтиламина (R009). Немедленное появление розово-красного окрашивания указывает на положительную реакцию.
• Тест на дезаминирование фенилаланина (лунка № 8): добавить 2–3 капли реагента TDA. Появление темно-зеленого окрашивания в течение одной минуты свидетельствует о положительной реакции.
• Оксидазный тест (лунка № 12): добавить 1–2 капли реагента Гордона-Маклеода. Появление пурпурно-синего окрашивания в течение 5–10 секунд указывает на положительную реакцию. Допускается замедленная положительная реакция до 60 секунд. Отсутствие окрашивания или реакция после 60 секунд считается отрицательной.

Важно: перед использованием реагенты должны быть доведены до комнатной температуры.

Ограничения метода

1. Набор KB019 нельзя использовать непосредственно для клинических образцов; требуется предварительное выделение и очистка культуры.
2. В тестах на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае результат фиксируется как «+» и инкубация продлевается до 48 часов.
3. Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Технические характеристики и условия эксплуатации

• Температура хранения при получении: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Время инкубации: 24–48 часов.
• Объем инокулята на лунку: 50 мкл.

Комплект поставки (на 1 набор)

• 10 стрипов KB019.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист записи данных.
• Индекс идентификации.
• Материалы, достаточные для проведения 10 тестов.

Индекс идентификации