HiMedia KB019-10KT Набор для идентификации неферментирующих бактерий Hi24 (10 наборов)

Набор для идентификации неферментирующих бактерий HiMedia KB019-10KT Hi24 предназначен для стандартизированной цветометрической идентификации грамотрицательных неспорообразующих микроорганизмов по 12 традиционным биохимическим и 12 тестам утилизации углеводов. Набор применяют для скрининга потенциально патогенных микроорганизмов в клинических образцах, включая мочу, кровь, кал и энтерические материалы, при этом анализ проводят только после выделения и очистки чистой культуры.

Назначение и область применения

HiMedia KB019-10KT — система идентификации неферментирующих бактерий Hi24, рассчитанная на проведение 10 тестов. Неферментирующие микроорганизмы в рамках применения набора представлены грамотрицательными неспорообразующими бактериями, выделяемыми из клинических образцов.

Набор используют для:

• скрининга патогенных микроорганизмов из мочи, энтерических образцов и других соответствующих клинических материалов;
• идентификации представителей родов Acinetobacter, Bordetella, Burkholderia, Legionella, Moraxella, Pseudomonas и Stenotrophomonas;
• подтверждения принадлежности известных лабораторных штаммов;
• идентификации микроорганизмов по индексу идентификации, входящему в комплект.

Полный перечень микроорганизмов, идентифицируемых системой, приведён в таблице индекса идентификации.

Принцип идентификации

Каждый набор Hi24 представляет собой стандартизированную цветометрическую систему идентификации, включающую 12 традиционных биохимических тестов и 12 тестов утилизации углеводов.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстрата. В процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются изменением цвета питательной среды. Результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента.

Типы образцов

Для анализа используют клинические образцы:

• кровь;
• мочу;
• фекалии;
• энтерические образцы;
• материалы, связанные с внутрибольничными инфекциями;
• другие соответствующие клинические образцы.

Пробоотбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяют соответствующие методы отбора, транспортировки и обращения с материалом в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, предварительно выделяют и очищают; для анализа используют только чистые культуры.

Подготовка посевного материала

1. Выделите исследуемый микроорганизм на обычной питательной среде, например на питательном агаре M001/M1274 или агаре с инфузией мозга и сердца M211.
2. Отберите одну хорошо изолированную колонию.
3. Засейте колонию в 5 мл бульона с инфузией мозга и сердца.
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности посевного материала 0,1 OD при 620 нм или значения 0,5 по стандарту МакФарланда.
5. В качестве альтернативы для инокуляции можно использовать однородную суспензию, приготовленную в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
6. Плотность суспензии отрегулируйте до 0,1 OD при 620 нм или 0,5 по стандарту МакФарланда.

Примечания к подготовке инокулята

• Если мутность посевного материала ниже 0,1 OD, возможны ошибочные ложноотрицательные результаты.
• Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры, а не суспензии.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую ленту.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы можно инокулировать набор, прокалывая каждую отдельную лунку петлёй с одной порцией инокулята.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в таблице интерпретации результатов, входящей в комплект.

Реагенты для лунок № 1, 5, 8 и 12 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч. Перед использованием реагенты после извлечения из холодильника выдерживают до достижения комнатной температуры.

Тест на индол — лунка № 1

Добавьте 1–2 капли реактива Ковача R008.

• Положительная реакция: появление красновато-розовой окраски в течение 10 с.
• Отрицательная реакция: реактив остаётся бледно окрашенным.

Тест на восстановление нитратов — лунка № 5

Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015 и 1–2 капли раствора α-нафтиламина R009.

• Положительная реакция: немедленное появление розовато-красной окраски после добавления реагентов.
• Отрицательная реакция: изменения окраски отсутствуют.

Тест на дезаминирование фенилаланина — лунка № 8

Добавьте 2–3 капли реактива TDA.

• Положительная реакция: появление тёмно-зелёной окраски в течение 1 мин.
• Отрицательная реакция: изменения окраски отсутствуют.

Оксидазный тест — лунка № 12

Добавьте 1–2 капли реактива Гордона—Маклеода.

• Положительная реакция: появление пурпурно-синей окраски в течение 5–10 с.
• Отсроченная положительная реакция: изменение окраски в течение 60 с может быть отмечено отдельно.
• Отрицательная реакция: изменения окраски отсутствуют либо положительная реакция появляется с задержкой до 60 с.

Ограничения метода

1. KB019 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы для идентификации должны быть предварительно выделены и очищены. Используют только чистые культуры.
2. При проведении теста ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию до 48 ч.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты из-за мутаций либо вследствие влияния среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных справочных данных и результатов тестирования, полученных в лаборатории.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики питательной среды соответствуют ожидаемым при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

Условия хранения и срок годности

Температура хранения при получении: 2–8 °C.

Срок годности: 12 мес.

Комплект поставки

• Материалы для выполнения 10 тестов.
• 10 стрипов KB019.
• Техническая инструкция к продукту.
• Таблица интерпретации результатов.
• Лист регистрации результатов.
• Индекс идентификации.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Перед вскрытием набора прочитайте маркировку.
• Клинические образцы и микробные культуры следует считать потенциально патогенными и обращаться с ними соответствующим образом.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо соблюдать асептические условия.
• Не допускайте контакта реагентов с кожей, глазами и одеждой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в паспортах безопасности реагентов.

Утилизация использованных материалов

После применения наборы, а также материалы, использованные для выделения и инокуляции культур, включая пипетки и петли, необходимо обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством, после чего утилизировать сжиганием или автоклавированием в одноразовом пакете.

Индекс идентификации

Обозначения: «+» — положительная реакция, «−» — отрицательная реакция; пустая ячейка — реакция в таблице не указана.