HiMedia KB013-5KT Набор для идентификации Bacillus HiBacillus (5 наборов)

Набор для идентификации Bacillus HiBacillus HiMedia KB013-5KT представляет собой комбинацию из 12 биохимических тестов для определения видов рода Bacillus. Применяется для анализа чистых изолятов, полученных из клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом методе анализа, использующем утилизацию углеводов и специфические биохимические реакции для идентификации видов Bacillus. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании субстратов: метаболические изменения микроорганизмов при инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB013 нельзя использовать непосредственно для анализа клинических или пищевых проб. Требуется предварительное выделение и очистка организма:

1. Отобрать одну изолированную колонию.
2. Инокулировать в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубировать при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически открыть набор, снять защитную фольгу.
2. Внести в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативный метод: инокуляция путем прокалывания каждой лунки петлёй с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно таблице интерпретации. Реагенты в лунки № 2, 5 и 6 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Интерпретация тестов по лункам

Лунка № 1: Утилизация маланата

• Положительный результат: изменение цвета на синий.
• Отрицательный результат: светло-зелёный цвет или отсутствие изменений.

Лунка № 2: Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

• Добавить 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
• Положительный результат: появление розово-красного окрашивания через 5–10 минут.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета или медный цвет (реакция реагентов А и В).

Лунка № 3: Утилизация цитрата

• Положительный результат: изменение цвета на синий.
• Отрицательный результат: зелёный цвет или отсутствие изменений.

Лунка № 4: ONPG

• Положительный результат: изменение цвета с бесцветного на жёлтый.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета.

Лунка № 5: Восстановление нитратов

• Добавить 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
• Положительный результат: немедленное появление розово-красного окрашивания.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета.

Лунка № 6: Тест на каталазу

• Соскрести петлёй рост с поверхности. Окунуть петлю в чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂ (свежеприготовленным).
• Положительный результат: появление пузырьков (эффервесценция) на поверхности петли.
• Отрицательный результат: отсутствие пузырьков.

Лунка № 7: Утилизация аргинина

• Положительный результат: изменение цвета на пурпурный или тёмно-пурпурный.
• Отрицательный результат: отсутствие изменений или жёлтый цвет.

Лунки № 8–12: Ферментация углеводов (Сахароза, Маннит, Глюкоза, Арабиноза, Трегалоза)

• Положительный результат: изменение цвета на жёлтый.
• Отрицательный результат: красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

Состав набора (на 5 тестов)

• Стерильные среды в лунках (по 0,8 мл в каждой) для следующих тестов:
  • Маланат
  • Фогес-Проскауэр
  • Цитрат
  • ONPG
  • Восстановление нитратов
  • Каталаза
  • Утилизация аргинина
  • Утилизация 5 углеводов: сахароза, маннит, глюкоза, арабиноза, трегалоза
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты
• α-нафтиламин (раствор R009) для теста на нитраты
• Реагент Баритта A (R029) для VP-теста
• Реагент Баритта B (R030) для VP-теста
• Индекс идентификации
• Таблица интерпретации результатов и лист записи данных
• Технический вкладыш

Требования к дополнительному оборудованию (не входят в комплект)

• Стандарт МакФарланда
• Инокуляционные петли, пипетки
• Среды для обогащения / изоляционные среды

Справочные данные

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Bacillus

Условия эксплуатации и ограничения

Хранение и транспортировка

• При получении и в процессе хранения: +2…+8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Ограничения применения

• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат фиксируется как «$\pm$» и инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.
• Ошибочные ложноотрицательные результаты могут быть получены, если мутность инокулята ниже 0,1 OD.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для профессионального использования in vitro.
• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, очки и маску.
• Соблюдать правила асептики при инокуляции и работе с наборами.
• Избегать контакта реагентов с кожей, глазами и одеждой.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (петли, пипетки) должны быть дезинфицированы подходящим средством, затем подвергнуты автоклавированию или сжиганию в специальных пакетах для отходов.