HiMedia KB013-20KT Набор для идентификации Bacillus HiBacillus (20 наборов)

Набор для идентификации Bacillus HiBacillus KB013-20KT производства HiMedia представляет собой систему из 12 биохимических тестов для дифференциации видов рода Bacillus. Применяется для анализа чистых изолятов из клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на использовании стандартизированных колориметрических тестов, определяющих способность микроорганизмов утилизировать конкретные углеводы и проводить специфические биохимические реакции. Результаты базируются на изменении pH среды и использовании субстратов; метаболические изменения проявляются в виде смены цвета индикаторов, что фиксируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор предназначен для идентификации видов Bacillus при работе с чистыми культурами. Не может быть использован напрямую для анализа клинических или пищевых проб — требуется предварительное выделение и очистка микроорганизма на соответствующих средах.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выберите одну изолированную колонию и инокулируйте её в 5 мл бульона BHI (M210).
2. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите по 50 мкл подготовленного инокулята в каждую лунку методом поверхностного посева.
3. Альтернативный метод: внесение инокулята в каждую лунку путем прокалывания петлей.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Оценка проводится согласно таблице интерпретации. Реагенты в лунки № 2, 5 и 6 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Интерпретация тестов по лункам

Лунка № 1: Утилизация маланота

• Положительный результат: изменение цвета на синий.
• Отрицательный результат: светло-зеленый цвет или отсутствие изменений.

Лунка № 2: Тест Фогеса-Проскауэра (VP)

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
2. Положительный результат: появление розово-красного окрашивания через 5–10 минут.
3. Отрицательный результат: отсутствие изменений или медный цвет (реакция реагентов).

Лунка № 3: Утилизация цитрата

• Положительный результат: изменение цвета на синий.
• Отрицательный результат: зеленый цвет или отсутствие изменений.

Лунка № 4: ONPG (β-галактозидаза)

• Положительный результат: изменение цвета с бесцветного на желтый.
• Отрицательный результат: отсутствие изменений.

Лунка № 5: Восстановление нитратов

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламин-реагента (R009).
2. Положительный результат: немедленное появление розово-красного окрашивания.
3. Отрицательный результат: отсутствие изменений цвета.

Лунка № 6: Тест на каталазу

1. Снимите петлей небольшое количество роста с поверхности.
2. Опустите петлю в чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂ (свежеприготовленным).
3. Положительный результат: интенсивное выделение пузырьков газа (эффервесценция).
4. Отрицательный результат: отсутствие пузырьков.

Лунка № 7: Утилизация аргинина

• Положительный результат: изменение цвета на пурпурный или темно-пурпурный.
• Отрицательный результат: отсутствие изменений или желтый цвет.

Лунки № 8–12: Ферментация углеводов (Сахароза, Маннит, Глюкоза, Арабиноза, Трегалоза)

• Положительный результат: изменение цвета на желтый.
• Отрицательный результат: красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

Сводная таблица тестов

Индекс идентификации видов Bacillus

Комплект поставки

1. Стерильные среды в лунках (на 20 тестов): маланот, Фогес-Проскауэр, цитрат, ONPG, восстановление нитратов, каталаза, утилизация аргинина и 5 углеводов (сахароза, маннит, глюкоза, арабиноза, трегалоза).
2. Технический вкладыш.
3. Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты.
4. $\alpha$-нафтиламин (R009) для теста на нитраты.
5. Индекс идентификации.
6. Реагент Баритта A (R029) для VP-теста.
7. Реагент Баритта B (R030) для VP-теста.
8. Таблица интерпретации результатов и лист записи данных.

Дополнительно требуемые материалы

• Стандарт МакФарленда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Среды для обогащения и изоляции.

Ограничения и предупреждения

• Температурный режим: реагенты перед использованием должны быть доведены до комнатной температуры.
• Слабые реакции: при слабой ферментации углеводов фиксируйте результат как «$\pm$» и продлите инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Погрешности: возможны ложноотрицательные результаты, если мутность инокулята ниже 0,1 OD.
• Мутации: возможны противоречивые результаты из-за мутаций штамма или влияния сред, использованных для первичного выделения.
• Безопасность: только для профессионального использования in vitro. Соблюдайте правила работы с инфекционным материалом; используйте СИЗ (перчатки, защита глаз и лица).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты подлежат дезинфекции, затем сжиганию или автоклавированию.