HiMedia KB013-20KT Набор для идентификации Bacillus HiBacillus (20 наборов)

Микробиологический набор HiMedia KB013-20KT Набор для идентификации Bacillus HiBacillus (20 наборов) — стандартизированная система из 12 биохимических и колориметрических тестов для идентификации видов Bacillus. Набор применяют с чистым изолятом, полученным из клинических и неклинических образцов, и не используют непосредственно для анализа исходных клинических или пищевых проб.

Идентификация изделия

Назначение

KB013 представляет собой комбинацию из 12 тестов для идентификации видов Bacillus из клинических и неклинических образцов с использованием чистого изолята. Набор также может применяться для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

KB013 — стандартизированная колориметрическая тест-система, основанная на определении утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для идентификации видов Bacillus. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов.

При инкубации виды Bacillus вызывают метаболические изменения, проявляющиеся изменением цвета среды. Результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента, если это предусмотрено тестом.

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 наборов KB013, рассчитанных соответственно на проведение 5, 10 или 20 тестов. В состав входят стерильные среды для идентификации видов Bacillus:

• малонат;
• реакция Фогеса—Проскауэра;
• цитрат;
• ONPG;
• восстановление нитрата;
• каталаза;
• утилизация аргинина;
• утилизация пяти углеводов: сахарозы, маннита, глюкозы, арабинозы и трегалозы.

Состав комплекта

1. Стерильные среды для тестов на малонат, реакцию Фогеса—Проскауэра, цитрат, ONPG, восстановление нитрата, каталазу, утилизацию аргинина и пяти углеводов: сахарозы, маннита, глюкозы, арабинозы и трегалозы.
2. Техническая инструкция по применению.
3. 0,8%-ная сульфаниловая кислота R015 для теста на восстановление нитрата.
4. Раствор α-нафтиламина R009 для теста на восстановление нитрата.
5. Индекс идентификации.
6. Реагент Баритта A R029 для теста Фогеса—Проскауэра.
7. Реагент Баритта B R030 для теста Фогеса—Проскауэра.
8. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

1. Стандарт мутности Мак-Фарланда.
2. Инокуляционные петли и пипетки.
3. Среда обогащения или изоляционные питательные среды.

Тип образца

Чистый изолят, полученный из клинического или неклинического образца.

Подготовка и обращение с образцами

Инструкции по сбору и обращению с образцами приведены в руководстве по применению набора.

KB013 нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами. Микроорганизм, подлежащий идентификации, предварительно выделяют и очищают; для тестирования используют только чистую культуру.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите отдельную изолированную колонию.
2. Перенесите колонию в 5 мл бульона для инфузии мозга и сердца BHI (M210).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч.
4. Подготовьте инокулят до мутности 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор в асептических условиях.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй, содержащей порцию инокулята.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Интерпретируйте результаты в соответствии с таблицей интерпретации результатов. Реагенты в лунки № 2, 5 и 6 добавляйте в конце периода инкубации, то есть через 24–48 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для тестов на малонат, реакцию Фогеса—Проскауэра, цитрат, ONPG, восстановление нитрата, каталазу, утилизацию аргинина и утилизацию пяти углеводов: сахарозы, маннита, глюкозы, арабинозы и трегалозы.

Объём среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

• Результат: соответствует критериям выпуска.

Интерпретация отдельных тестов

Результаты интерпретируют в соответствии с таблицей интерпретации результатов. Реагенты в лунки № 2, 5 и 6 добавляют в конце периода инкубации, через 24–48 ч.

Утилизация малоната: лунка № 1

• Положительная реакция: изменение цвета на синий.
• Отрицательная реакция: светло-зелёный цвет или отсутствие изменения цвета.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 2

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A R029.
2. Добавьте 1 каплю реагента Баритта B R030.
3. Положительная реакция: появление розово-красного окрашивания через 5–10 мин.
4. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или медное окрашивание, возникающее вследствие реакции реагентов A и B.

Утилизация цитрата: лунка № 3

• Положительная реакция: изменение цвета на синий.
• Отрицательная реакция: зелёный цвет или отсутствие изменения цвета.

Тест ONPG: лунка № 4

• Положительная реакция: изменение цвета с бесцветного на жёлтый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

Тест на восстановление нитрата: лунка № 5

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015.
2. Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина R009.
3. Положительная реакция: немедленное появление розово-красного окрашивания после добавления реагентов.
4. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

Тест на каталазу: лунка № 6

1. Снимите инокуляционной петлёй порцию роста с поверхности среды.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O.
3. Положительная реакция: выделение пузырьков газа с поверхности петли.
4. Отрицательная реакция: отсутствие выделения пузырьков газа.

Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Утилизация аргинина: лунка № 7

• Положительная реакция: изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или появление жёлтого цвета.

Тест на ферментацию углеводов: лунки № 8–12

• Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
• Отрицательная реакция: красный цвет или отсутствие изменения цвета.

Таблица интерпретации результатов