HiMedia KB013-10KT Набор для идентификации Bacillus HiBacillus (10 наборов)

Набор для идентификации Bacillus HiBacillus KB013-10KT производства HiMedia представляет собой комбинацию из 12 биохимических тестов для определения видов бактерий рода Bacillus. Система предназначена для анализа чистых изолятов из клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на использовании стандартизированных колориметрических тестов, определяющих утилизацию углеводов и специфические биохимические свойства видов Bacillus. В основе метода лежит изменение pH среды и использование субстратов: метаболические изменения в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB013 нельзя использовать напрямую для анализа клинических или пищевых проб. Требуется предварительное выделение и очистка микроорганизма.

1. Выберите одну изолированную колонию.
2. Инокулируйте в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.

Посев набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативный метод: внесение инокулята в каждую лунку путем прокалывания (stabbing) петлей.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно таблице интерпретации. Добавление реагентов в лунки № 2, 5 и 6 производится строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Описание реакций по лункам:

• Лунка 1 (Утилизация малатоната): Положительный результат — изменение цвета на синий. Отрицательный — светло-зеленый цвет или отсутствие изменений.
• Лунка 2 (Тест Фогеса-Проскауэра): Добавьте 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030). Положительный результат — появление розово-красного окрашивания через 5–10 минут. Отрицательный — отсутствие изменений или медный цвет.
• Лунка 3 (Утилизация цитрата): Положительный результат — изменение цвета на синий. Отрицательный — зеленый цвет или отсутствие изменений.
• Лунка 4 (ONPG): Положительный результат — изменение цвета с бесцветного на желтый. Отрицательный — отсутствие изменений.
• Лунка 5 (Восстановление нитратов): Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительный результат — немедленное появление розово-красного окрашивания. Отрицательный — отсутствие изменений.
• Лунка 6 (Каталазный тест): Снимите петлей небольшое количество роста с поверхности. Опустите петлю в чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂ (свежеприготовленным). Положительный результат — появление пузырьков газа (эффервесценция). Отрицательный — отсутствие пузырьков.
• Лунка 7 (Утилизация аргинина): Положительный результат — изменение цвета на пурпурный или темно-пурпурный. Отрицательный — отсутствие изменений или желтый цвет.
• Лунки 8–12 (Ферментация углеводов): Положительный результат — изменение цвета на желтый. Отрицательный — красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 10
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35–37 °C
• Время инкубации: 24–48 часов
• Состав тестов: малатонат, Фогес-Проскауэр, цитрат, ONPG, восстановление нитратов, каталаза, утилизация аргинина, утилизация углеводов (сахароза, маннит, глюкоза, арабиноза, трегалоза).

Таблицы интерпретации и идентификации

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Bacillus

Комплект поставки

• Стерильные среды для тестов (малатонат, Фогес-Проскауэр, цитрат, ONPG, восстановление нитратов, каталаза, утилизация аргинина и 5 видов углеводов: сахароза, маннит, глюкоза, арабиноза, трегалоза).
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты.
• Раствор $\alpha$-нафтиламина (R009) для теста на нитраты.
• Реагент Баритта A (R029) для VP-теста.
• Реагент Баритта B (R030) для VP-теста.
• Индекс идентификации.
• Таблица интерпретации результатов и лист записи данных.
• Технический вкладыш.

Дополнительное оборудование (не входит в комплект)

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогащающие / изоляционные среды.

Ограничения и предостережения

• Требования к инокуляту: Ошибочные ложноотрицательные результаты возможны, если мутность инокулята ниже 0,1 OD.
• Температурный режим: Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.
• Специфика реакций: При тестах на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы дают слабую реакцию (записывается как $\pm$); инкубация в этом случае продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Чистота культуры: Набор нельзя использовать напрямую для клинических проб; допускается использование только чистых культур.
• Мутации: Возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для первичного выделения.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: При получении и далее хранить при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: После использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием в специальных пакетах.

Меры безопасности

Только для профессионального использования (In Vitro диагностика). При работе с образцами и культурами необходимо использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте правила асептики. Избегайте контакта реагентов с кожей и слизистыми оболочками.