HiMedia KB012A-5KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (5 наборов)

Набор для идентификации Listeria HiMedia KB012A-5KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (5 наборов) производства HiMedia предназначен для проведения 12 биохимических тестов. Набор применяют для идентификации видов Listeria из клинических и неклинических образцов, при этом материал нельзя использовать непосредственно для исследования исходных образцов без предварительного выделения и очистки культуры.

Идентификация товара

Назначение

KB012A — комбинация из 12 тестов для идентификации видов Listeria из клинических и неклинических образцов. Набор также может использоваться для подтверждения свойств известных лабораторных штаммов.

Тип образца: чистая изолированная культура из клинического или неклинического образца.

Назначение изделия: среда.

Состав и комплектность

Каждый комплект содержит 5, 10 или 20 наборов KB012A, рассчитанных соответственно на проведение 5, 10 или 20 тестов. В состав входят стерильные среды для определения каталазы, восстановления нитрата, гидролиза эскулина, реакции Фогеса—Проскауэра, реакции с метиловым красным и утилизации 7 углеводов:

• ксилоза;
• лактоза;
• глюкоза;
• α-метил-D-маннозид;
• рамноза;
• сахароза;
• маннитол.

Также в комплект входят:

• сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на восстановление нитрата;
• реагент N,N-диметил-1-нафтиламина (R009) для теста на восстановление нитрата;
• реагент Баритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра;
• реагент Баритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра;
• реагент «Метиловый красный» (1007) для теста с метиловым красным;
• техническая инструкция по применению;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов;
• индекс идентификации.

Количество среды: 0,8 мл в каждой лунке.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли;
• пипетки;
• обогащающая среда;
• изоляционные среды.

Для выделения микроорганизмов могут применяться агар PALCAM (M1064) или триптиказо-соевый агар (M290). Для получения инокулята используется бульон BHI (M210).

Принцип идентификации

Каждый KB012A представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических характеристик, специфичных для идентификации видов Listeria.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации виды Listeria вызывают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды. Результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента.

Подготовка образца и инокулята

KB012A нельзя использовать непосредственно для клинических или пищевых образцов. Идентифицируемый микроорганизм сначала необходимо выделить и очистить.

Приготовление инокулята

1. Выделите микроорганизм на агаре PALCAM (M1064) или триптиказо-соевом агаре (M290).
2. Отберите одну изолированную колонию.
3. Инокулируйте колонию в 5 мл бульона BHI (M210).
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности инокулята 1,0 OD при 620 нм.

Тип используемого материала: чистая изолированная культура.

Сбор и обращение с образцами: выполнять в соответствии с инструкцией по применению.

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл приготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую отдельную лунку можно инокулировать прокалыванием петлёй, содержащей инокулят.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют по таблице интерпретации результатов. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 5 добавляют в конце периода инкубации — через 24–48 ч.

Методики биохимических тестов

1. Тест на каталазу — лунка № 1

1. Снимите петлёй часть роста с поверхности лунки № 3.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции выделение пузырьков газа отсутствует.

Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % необходимо готовить непосредственно перед использованием.

2. Восстановление нитрата — лунка № 2

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
2. Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
3. Немедленное появление розовато-красного окрашивания после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

3. Гидролиз эскулина — лунка № 3

• Положительная реакция проявляется изменением цвета на чёрный.
• Зелёное окрашивание или отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

4. Тест Фогеса—Проскауэра — лунка № 4

1. Добавьте 1–2 капли реагента Баритта A (R029).
2. Добавьте 1–2 капли реагента Баритта B (R030).
3. Положительная реакция проявляется появлением розовато-красного окрашивания через 5–10 мин.
4. Отсутствие изменения цвета или медное окрашивание, обусловленное реакцией реагентов A и B, указывает на отрицательную реакцию.

5. Тест с метиловым красным — лунка № 5

1. Добавьте 2–3 капли индикатора «Метиловый красный» (1007).
2. Положительная реакция проявляется появлением красного окрашивания.
3. Желтовато-оранжевое окрашивание указывает на отрицательную реакцию.

6. Тест на ферментацию углеводов — лунки № 6–12

• Положительная реакция проявляется изменением цвета на жёлтый.
• Красное окрашивание или отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Таблица интерпретации результатов