HiMedia KB012A-5KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (5 наборов)

Набор для идентификации Listeria HiListeria HiMedia KB012A-5KT (5 наборов) представляет собой комбинацию из 12 биохимических тестов для определения видов листерий. Применяется для анализа клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом анализе подвижности, утилизации углеводов и других биохимических свойств, специфичных для видов Listeria. В основе тестов лежит принцип изменения pH и использования субстратов: в процессе инкубации метаболические изменения микроорганизмов приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор предназначен для работы с чистыми изолятами, полученными из клинических и неклинических проб. Не может использоваться для прямого анализа образцов пищи или биоматериала без предварительного выделения и очистки культуры.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте целевой микроорганизм на агаре PALCAM (M1064) или соево-казеиновом агаре (M290).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята 1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. В асептических условиях откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативный метод: внесение инокулята в каждую лунку путем прокалывания петлей.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно таблице интерпретации. Реагенты в лунки № 1, 2, 4, 5 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Особенности проведения тестов по лункам:

• Лунка № 1 (Каталаза): Снимите петлей рост с поверхности 3-й лунки и погрузите в пробирку с 3 % H₂O₂ (свежеприготовленным). Положительный результат — появление пузырьков газа (эффервесценция).
• Лунка № 2 (Восстановление нитратов): Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительный результат — быстрое появление розово-красного окрашивания.
• Лунка № 3 (Гидролиз эскулина): Положительный результат — изменение цвета среды на черный.
• Лунка № 4 (Тест Фогеса-Проскауэра): Добавьте 1–2 капли реагента Барритта А (R029) и 1–2 капли реагента Барритта B (R030). Положительный результат — появление розово-красного цвета через 5–10 минут.
• Лунка № 5 (Метиловый красный): Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Положительный результат — красный цвет.
• Лунки № 6–12 (Ферментация углеводов): Положительный результат — изменение цвета среды на желтый.

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 5
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35–37 °C
• Время инкубации: 24–48 часов
• Тип образца: чистый изолят

Комплект поставки

• Стерильные среды для тестов:
  • Каталаза
  • Восстановление нитратов
  • Гидролиз эскулина
  • Фогеса-Проскауэра (VP)
  • Метиловый красный (MR)
  • Утилизация 7 углеводов: ксилоза, лактоза, глюкоза, $\alpha$-метил-D-маннозид, рамноза, сахароза, маннит.
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты.
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламин (R009) для теста на нитраты.
• Реагент Барритта A (R029) для VP-теста.
• Реагент Барритта B (R030) для VP-теста.
• Реагент метилового красного (I007) для MR-теста.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Сопутствующие материалы (не входят в комплект)

• Стандарт МакФарленда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные и изоляционные среды.

Таблицы интерпретации и идентификации

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Listeria

Условные обозначения:

• = Положительная реакция (более 90 % штаммов);

• = Отрицательная реакция; NR = Не сообщается; V = Вариабельная реакция.

Ограничения и предостережения

• Температурный режим: Перед использованием реагенты должны быть доведены до комнатной температуры.
• Слабые реакции: При слабой ферментации углеводов результат фиксируется как «$\pm$», инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Погрешности: Ложноотрицательные результаты возможны при мутности инокулята менее 0,1 OD.
• Мутации: Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций штаммов или влияния сред, использованных для изоляции.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: При получении и в процессе эксплуатации хранить при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: После использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием.

Меры безопасности

Только для профессионального использования (In Vitro диагностика). При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать правила асептики и стандартные инструкции по работе с клиническими образцами. Избегать попадания реагентов на кожу и слизистые оболочки.