HiMedia KB012A-20KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (20 наборов)

Набор для идентификации Listeria HiListeria HiMedia KB012A-20KT представляет собой комбинацию из 12 биохимических тестов для определения видов Listeria в клинических и неклинических образцах. Система предназначена для идентификации чистых изолятов и валидации известных лабораторных штаммов; в один набор входит материал для проведения 20 тестов.

Принцип измерения

Система KB012A основана на колориметрическом анализе подвижности, утилизации углеводов и других биохимических свойств, специфичных для видов Listeria. В основе тестов лежит принцип изменения pH и использования субстратов: метаболические изменения микроорганизмов приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор используется для работы с чистыми изолятами, полученными из клинических материалов и неклинических проб. Применяется в микробиологических лабораториях для дифференциации видов рода Listeria.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB012A не предназначен для прямого использования с клиническими или пищевыми образцами.

1. Изолируйте и очистите целевой микроорганизм на агаре PALCAM (M1064) или соево-казеиновом агаре (Tryptone Soya Agar M290).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения оптической плотности инокулята 1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно таблице интерпретации. Реагенты в лунки № 1, 2, 4, 5 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

1. Тест на каталазу (лунка № 1): Снимите петлей рост из 3-й лунки, погрузите в пробирку с 3 % H₂O₂ (свежеприготовленным). Положительный результат — появление пузырьков газа (эффервесценция).
2. Восстановление нитратов (лунка № 2): Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительный результат — быстрое появление розово-красного окрашивания.
3. Гидролиз эскулина (лунка № 3): Положительный результат — окрашивание среды в черный цвет. Отрицательный — зеленая среда или отсутствие изменения цвета.
4. Тест Фогеса-Проскауэра (лунка № 4): Добавьте 1–2 капли реагента Барритта А (R029) и 1–2 капли реагента Барритта B (R030). Положительный результат — появление розово-красного цвета через 5–10 минут.
5. Тест на метиловый красный (лунка № 5): Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Положительный результат — красный цвет; отрицательный — желто-оранжевый.
6. Ферментация углеводов (лунки № 6–12): Положительный результат — изменение цвета среды на желтый. Отрицательный — красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 20
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35–37 °C
• Время инкубации: 24–48 часов
• Тип образца: чистый изолят

Комплект поставки

• Стерильные среды в лунках для тестов:
  • Каталаза
  • Восстановление нитратов
  • Гидролиз эскулина
  • Фогес-Проскауэр (VP)
  • Метиловый красный (MR)
  • Утилизация 7 углеводов: ксилоза, лактоза, глюкоза, $\alpha$-метил-D-маннозид, рамноза, сахароза, маннитол
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина (R009) для теста на нитраты
• Реагент Барритта A (R029) для VP-теста
• Реагент Барритта B (R030) для VP-теста
• Реагент метилового красного (I007) для MR-теста
• Технический вкладыш
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных (индекс идентификации)

Необходимые материалы (не входят в комплект)

• Стандарт МакФарленда
• Инокуляционные петли, пипетки
• Среды для обогащения и изоляции

Таблицы интерпретации и идентификации

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Listeria

Примечание: + = положительная реакция (более 90 % штаммов); - = отрицательная; NR = не сообщается; V = вариабельная реакция.

Ограничения и предостережения

• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры после извлечения из холодильника.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «$\pm$» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.
• Ложноотрицательные результаты могут быть получены, если мутность инокулята составляет менее 0,1 OD.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при получении: 2–8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.
• После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием.

Безопасность

Продукт предназначен для диагностики in vitro и профессионального использования. При работе с образцами и культурами необходимо соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Избегайте контакта реагентов с кожей и слизистыми оболочками.