HiMedia KB012A-10KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (10 наборов)

Набор для идентификации Listeria HiMedia KB012A-10KT HiListeria (10 наборов) включает 12 биохимических тестов для идентификации видов Listeria. Применяется для клинических и неклинических образцов, а также для подтверждения лабораторных штаммов, но не используется непосредственно для клинических или пищевых образцов без предварительного выделения и очистки культуры.

Назначение

KB012A представляет собой комбинацию из 12 тестов для идентификации видов Listeria из клинических и неклинических образцов. Набор также применяется для валидации известных лабораторных штаммов.

Идентификация изделия

Состав набора

Каждый комплект содержит 5, 10 или 20 наборов KB012A; материала достаточно для выполнения соответственно 5, 10 или 20 тестов.

В состав входят:

• Стерильные среды для определения каталазы, восстановления нитрата, гидролиза эскулина, реакции Фогеса—Проскауэра, реакции с метиловым красным и утилизации 7 углеводов: ксилозы, лактозы, глюкозы, α-метил-D-маннозида, рамнозы, сахарозы и маннита.
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на восстановление нитрата.
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина (R009) для теста на восстановление нитрата.
• Реагент Барритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра.
• Реагент Барритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра.
• Реагент «Метиловый красный» (1007) для теста с метиловым красным.
• Техническая инструкция по применению.
• Таблица интерпретации результатов и рабочий лист для внесения результатов с индексом идентификации.

Необходимые, но не входящие в комплект материалы

• Стандарт Мак-Фарланда.
• Инокуляционные петли и пипетки.
• Среда обогащения или изоляционные среды.

Принцип идентификации

KB012A представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для идентификации видов Listeria.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстрата. При инкубации виды Listeria демонстрируют метаболические изменения, которые проявляются изменением окраски среды. Результаты интерпретируют визуально или после добавления соответствующего реагента, если он предусмотрен методикой.

Тип образца

Для анализа используют чистую культуру, выделенную из клинического или неклинического образца.

Пробоподготовка

KB012A нельзя использовать непосредственно для клинических или пищевых образцов. Микроорганизм, подлежащий идентификации, предварительно выделяют и очищают.

Для выделения используют одну из следующих сред:

• агар PALCAM (M1064);
• триптон-соевый агар (M290).

Изолированную одиночную колонию переносят в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируют при 35–37 °C в течение 6–8 ч, пока мутность инокулята не достигнет оптической плотности 1,0 OD при 620 нм.

Методика проведения анализа

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор в асептических условиях и удалите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. В качестве альтернативы каждую отдельную лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй, содержащей порцию инокулята.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с таблицей интерпретации результатов. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 5 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 24–48 ч.

Методики отдельных тестов

1. Тест на каталазу: лунка № 1

• Снимите инокуляционной петлёй порцию роста с поверхности третьей лунки.
• Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
• Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
• При отрицательной реакции выделение пузырьков газа отсутствует.
• Раствор 3 % H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

2. Восстановление нитрата: лунка № 2

• Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
• Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
• Немедленное появление розово-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

3. Гидролиз эскулина: лунка № 3

• Положительная реакция проявляется изменением окраски на чёрную.
• Зелёная окраска или отсутствие изменения окраски указывают на отрицательную реакцию.

4. Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 4

• Добавьте 1–2 капли реагента Барритта A (R029).
• Добавьте 1–2 капли реагента Барритта B (R030).
• Положительная реакция проявляется появлением розово-красной окраски через 5–10 мин.
• Отсутствие изменения окраски или медная окраска, обусловленная реакцией реагентов A и B, указывают на отрицательную реакцию.

5. Тест с метиловым красным: лунка № 5

• Добавьте 2–3 капли индикатора «Метиловый красный» (1007).
• Положительная реакция проявляется появлением красной окраски.
• Желтовато-оранжевая окраска указывает на отрицательную реакцию.

6. Тест на ферментацию углеводов: лунки № 6–12

• Положительная реакция проявляется изменением окраски на жёлтую.
• Красная окраска или отсутствие изменения окраски указывают на отрицательную реакцию.

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Listeria

|