HiMedia KB012A-10KT Набор для идентификации Listeria HiListeria (10 наборов)

Набор для идентификации Listeria HiListeria KB012A-10KT производства HiMedia представляет собой систему из 12 биохимических тестов для дифференциации видов Listeria. Применяется для анализа клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом анализе подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для видов Listeria. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании специфических субстратов: метаболические изменения в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления соответствующих реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB012A не предназначен для прямого использования с клиническими или пищевыми образцами. Исследуемый микроорганизм должен быть предварительно изолирован и очищен.

1. Изолируйте микроорганизм на агаре PALCAM (M1064) или соево-казеиновом агаре (M290).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при температуре 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята 1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативно возможен метод инокуляции путем погружения петли с инокулятом в каждую лунку.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Добавление реагентов в лунки № 1, 2, 4, 5 производится строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Описание тестов по лункам

1. Тест на каталазу (лунка № 1): Снимите петлей рост с поверхности 3-й лунки, погрузите в пробирку с 3 % раствором H₂O₂. Положительный результат — появление пузырьков газа (эффервесценция).
2. Восстановление нитратов (лунка № 2): Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительный результат — появление розово-красного окрашивания.
3. Гидролиз эскулина (лунка № 3): Положительный результат — изменение цвета среды на черный. Отрицательный — зеленый цвет или отсутствие изменений.
4. Тест Фогеса-Проскауэра (VP) (лунка № 4): Добавьте 1–2 капли реагента Барритта А (R029) и 1–2 капли реагента Барритта Б (R030). Положительный результат — появление розово-красного цвета через 5–10 минут.
5. Тест на метиловый красный (MR) (лунка № 5): Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Положительный результат — красный цвет; отрицательный — желтовато-оранжевый.
6. Ферментация углеводов (лунки № 6–12): Положительный результат — изменение цвета среды на желтый. Отрицательный — красный цвет или отсутствие изменений.

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Listeria

Примечание: + = положительная реакция (более 90 % штаммов); - = отрицательная; NR = не сообщается; V = вариабельная реакция.

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 10
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35–37 °C
• Время инкубации: 24–48 часов
• Тип образца: чистая культура из клинических и неклинических проб

Комплект поставки

1. Стерильные среды для тестов (в количестве 10 наборов):
   • Каталаза
   • Восстановление нитратов
   • Гидролиз эскулина
   • Фогес-Проскауэр
   • Метиловый красный
   • Утилизация углеводов (7 тестов): ксилоза, лактоза, глюкоза, $\alpha$-метил-D-маннозид, рамноза, сахароза, маннитол.
2. Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитраты.
3. Реагент N,N-диметил-1-нафтиламин (R009) для теста на нитраты.
4. Реагент Барритта А (R029) для VP-теста.
5. Реагент Барритта Б (R030) для VP-теста.
6. Реагент метилового красного (I007) для MR-теста.
7. Технический вкладыш.
8. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Дополнительное оборудование (не входит в комплект)

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Среды для обогащения и изоляции.

Ограничения и предостережения

• Температурный режим: Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.
• Слабые реакции: При слабой ферментации углеводов результат фиксируется как «$\pm$» и инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Погрешности: Возможны ложноотрицательные результаты, если мутность инокулята составляет менее 0,1 OD.
• Требования к пробе: Набор нельзя использовать напрямую с клиническими или пищевыми образцами; требуется предварительное выделение чистой культуры.
• Мутации: В отдельных случаях возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для изоляции.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при поступлении: +2…+8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием в специальных пакетах.