HiMedia KB010-5KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (5 наборов)

Набор для идентификации E. coli HiMedia HiE. coli (KB010-5KT) представляет собой стандартизированную колориметрическую систему из 5 наборов для дифференциации видов Escherichia coli с использованием чистых изолятов. Система включает восемь традиционных биохимических тестов и четыре теста на утилизацию углеводов, основанных на изменении pH и использовании субстратов.

Принцип измерения

Идентификация основана на биохимических свойствах микроорганизмов: в процессе инкубации E. coli вызывают метаболические изменения, которые проявляются в виде изменения цвета среды. Изменение цвета может происходить спонтанно или после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте исследуемый организм на стандартной среде, например, питательном агаре (M001), или дифференциальной среде, такой как агар МакКонки (M082).
2. Выберите одну изолированную колонию и инокулируйте в 5 мл бульона BHI (M210). Инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по МакФарланду. При необходимости увеличьте время инкубации до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: возьмите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте гомогенную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора с плотностью 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. В асептических условиях откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативно возможен метод инокуляции путем погружения петли с инокулятом в каждую лунку.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно идентификационному индексу. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 6 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Детальная интерпретация по тестам:

• Метиловый красный (лунка № 1): добавить 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Положительный результат — красный цвет; отрицательный — желтовато-оранжевый.
• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка № 2): добавить 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030). Положительный результат — розово-красный цвет через 5–10 минут; отрицательный — отсутствие изменения цвета или медный цвет.
• Утилизация цитрата (лунка № 3): положительный результат — изменение цвета на синий; отрицательный — зеленый цвет или отсутствие изменений.
• Индол (лунка № 4): добавить 2–3 капли реагента Ковакса (R008). Положительный результат — появление розово-красного кольца; отрицательный — отсутствие кольца.
• Глюкуронидаза (лунка № 5): положительный результат — изменение бесцветной среды на сине-зелёную; отрицательный — среда остается бесцветной.
• Восстановление нитратов (лунка № 6): добавить 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительный результат — розово-красный цвет; отрицательный — бесцветная среда.
• ONPG (лунка № 7): положительный результат — изменение бесцветной среды на желтую; отрицательный — бесцветная среда.
• Утилизация лизина (лунка № 8): положительный результат — изменение цвета с оливково-зелёного на светло- или темно-пурпурный; отрицательный — желтый цвет.
• Ферментация углеводов (лунки № 9–12): положительный результат — изменение цвета на желтый; отрицательный — красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

Сводная таблица интерпретации

Идентификационный индекс видов Escherichia

Примечание: + = положительная реакция (> 90%), − = отрицательная реакция (> 90%), V = вариабельная реакция (11–89%).

Общие параметры

• Тип образца: чистый изолят из клинических и неклинических проб.
• Состав набора: стерильные среды для 8 биохимических тестов и 4 тестов на углеводы (лактоза, глюкоза, сахароза, сорбитол), технический вкладыш, карта интерпретации, идентификационный индекс, реагенты: метиловый красный (I007), Баритт А (R029), Баритт B (R030), реагент Ковакса (R008), сульфаниловая кислота 0,8 % (R015), N,N-диметил-1-нафтиламин (R009).
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Условия хранения: при получении хранить при температуре +2…+8 °C.

Ограничения и требования

• Реагенты перед использованием необходимо довести до комнатной температуры.
• При слабых реакциях в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «$\pm$» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.
• Ложноотрицательные результаты могут быть получены при мутности инокулята ниже 0,1 OD.
• Набор не предназначен для прямого использования с клиническими образцами; требуется предварительное выделение чистой культуры на соответствующих средах.

Комплект поставки

• Набор для идентификации (5 наборов в упаковке).
• Реагенты для тестов: метиловый красный, Баритт А, Баритт B, реагент Ковакса, сульфаниловая кислота, N,N-диметил-1-нафтиламин.
• Документация: технический вкладыш, карта интерпретации результатов, лист записи данных, идентификационный индекс.

Дополнительное оборудование

Для работы с набором требуются (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Среды для обогащения и изоляции.

Безопасность и утилизация

• Использование: только для профессиональной диагностики in vitro.
• Меры предосторожности: использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать правила асептики.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.