HiMedia KB010-20KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (20 наборов)

Набор для идентификации E. coli HiE. coli (KB010-20KT) производства HiMedia представляет собой стандартизированную колориметрическую систему, включающую 8 биохимических и 4 углеводных теста. Применяется для идентификации и дифференциации чистых изолятов Escherichia coli из клинических и неклинических образцов на основе изменения pH и утилизации субстратов.

Принцип измерения

Идентификация основана на метаболических изменениях микроорганизмов, которые проявляются в виде изменения цвета питательной среды. Изменение цвета происходит либо спонтанно в процессе инкубации, либо после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте исследуемый микроорганизм на стандартной среде, например, питательном агаре (M001), или дифференциальной среде, такой как агар МакКонки (M082).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по МакФарланду. При необходимости увеличьте время инкубации до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. В асептических условиях откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите по 50 мкл подготовленного инокулята в каждую лунку методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен посев путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно идентификационному индексу. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 6 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Детальная оценка тестов

• Метиловый красный (лунка № 1): добавить 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Положительная реакция — красный цвет; отрицательная — желтовато-оранжевый.
• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка № 2): добавить 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030). Положительная реакция — появление розово-красного цвета через 5–10 минут; отрицательная — отсутствие изменения цвета или медный цвет.
• Утилизация цитрата (лунка № 3): положительная реакция — изменение цвета на синий; отрицательная — зеленый цвет или отсутствие изменений.
• Индол (лунка № 4): добавить 2–3 капли реагента Ковакса (R008). Положительная реакция — появление розово-красного кольца; отрицательная — отсутствие кольца.
• Глюкуронидаза (лунка № 5): положительная реакция — бесцветная среда становится сине-зеленой; отрицательная — среда остается бесцветной.
• Восстановление нитратов (лунка № 6): добавить 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Положительная реакция — розово-красный цвет; отрицательная — бесцветная среда.
• ONPG (лунка № 7): положительная реакция — изменение бесцветной среды на желтую; отрицательная — среда остается бесцветной.
• Утилизация лизина (лунка № 8): положительная реакция — изменение цвета с оливково-зеленого на светло- или темно-пурпурный; отрицательная — желтый цвет.
• Ферментация углеводов (лунки № 9–12): положительная реакция — изменение цвета на желтый; отрицательная — красный цвет или отсутствие изменений.

Сводная таблица интерпретации

Идентификационный индекс видов Escherichia

Примечание: + = положительная реакция (> 90 % штаммов); - = отрицательная реакция (> 90 % штаммов); V = вариабельная реакция (11–89 % штаммов).

Технические характеристики

• Состав набора:
  • Стерильные среды в лунках для тестов: метиловый красный, Фогес-Проскауэр, утилизация цитрата, индол, глюкуронидаза, восстановление нитратов, ONPG, утилизация лизина, а также 4 теста на утилизацию углеводов (лактоза, глюкоза, сахароза, сорбитол).
  • Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
  • Реагенты: индикатор метилового красного (I007), реагент Баритта А (R029), реагент Баритта B (R030), реагент Ковакса (R008), сульфаниловая кислота 0,8 % (R015), N,N-диметил-1-нафтиламин (R009).
  • Документация: техническая вставка, таблица интерпретации результатов, лист записи данных, идентификационный индекс.
• Тип образца: чистый изолят из клинических или неклинических проб.
• Условия хранения: при получении хранить при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: указан на этикетке.

Ограничения и требования

• Реагенты перед использованием необходимо довести до комнатной температуры.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «$\pm$» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или особенностей используемых сред для изоляции и культивирования.
• Ложноотрицательные результаты могут быть получены при мутности инокулята ниже 0,1 OD.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.
• Набор нельзя использовать напрямую для анализа клинических образцов; требуется предварительное выделение чистой культуры на соответствующих средах.

Комплект поставки

• Набор для идентификации (в зависимости от модификации: на 5, 10 или 20 тестов).
• Полный комплект необходимых реагентов (I007, R029, R030, R008, R015, R009).
• Инструкция и формы для записи результатов.

Не входят в комплект: стандарт МакФарланда, инокуляционные петли, пипетки, среды для обогащения и изоляции.

Безопасность и утилизация

• Только для профессионального использования in vitro.
• При работе использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать правила асептики при инокуляции.
• После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием в специальных пакетах для утилизации согласно лабораторным протоколам работы с инфекционным материалом.