HiMedia KB010-20KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (20 наборов)

Набор для идентификации кишечной палочки HiMedia KB010-20KT HiE. coli (20 наборов) — стандартизированная колориметрическая система на 12 биохимических тестов для дифференциации Escherichia coli. Набор применяют для идентификации чистых изолятов из клинических и не связанных с клиникой образцов; прямое исследование клинических образцов не допускается.

Назначение и идентификация

Набор HiMedia KB010-20KT предназначен для идентификации и дифференциации Escherichia coli по восьми стандартным биохимическим тестам и четырём тестам утилизации углеводов.

Принцип идентификации

Метод основан на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации метаболические реакции Escherichia coli проявляются изменением окраски питательной среды. Для ряда тестов результат регистрируют непосредственно по цвету среды, для других после завершения инкубации добавляют соответствующие реагенты.

Escherichia coli — грамотрицательные коккобациллярные бактерии, ферментирующие лактозу; микроорганизмы этого вида часто выделяют из клинических и не связанных с клиникой образцов.

Подготовка посевного материала

1. Выделите исследуемый микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре Nutrient Agar (M001), или на дифференциальной среде, например на агаре МакКонки MacConkey Agar (M082).
2. Возьмите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI Broth (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет 0,1 оптической плотности при 620 нм или значения 0,5 по стандарту Мак-Фарланда. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае продолжайте инкубацию до достижения мутности 0,1 оптической плотности при 620 нм.
3. Допускается альтернативная подготовка инокулята: возьмите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,1 оптической плотности при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы допускается инокуляция набора прокалыванием каждой отдельной лунки петлёй с инокулятом.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с идентификационным индексом. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 6 добавляют по окончании инкубации, то есть через 18–24 ч.

Подробная интерпретация по лункам

1. Тест с метиловым красным, лунка № 1

   • Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007).
   • Положительная реакция: появление красной окраски.
   • Отрицательная реакция: желтовато-оранжевая окраска.

2. Тест Фогеса — Проскауэра, лунка № 2

   • Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
   • Положительная реакция: появление розово-красной окраски через 5–10 мин.
   • Отрицательная реакция: отсутствие изменения окраски или медная окраска, обусловленная взаимодействием реагентов A и B.

3. Тест на утилизацию цитрата, лунка № 3

   • Положительная реакция: изменение окраски на синюю.
   • Отрицательная реакция: зелёная окраска или отсутствие изменения цвета.

4. Индольный тест, лунка № 4

   • Добавьте 2–3 капли реактива Ковача (R008).
   • Положительная реакция: появление розово-красного кольца.
   • Отрицательная реакция: отсутствие красного кольца.

5. Тест на глюкуронидазу, лунка № 5

   • Положительная реакция: бесцветная среда становится голубовато-зелёной.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.

6. Тест на восстановление нитрата, лунка № 6

   • Добавьте 1–2 капли 0,8%-ной сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
   • Положительная реакция: появление розово-красной окраски.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.

7. Тест ONPG, лунка № 7

   • Положительная реакция: бесцветная среда становится жёлтой.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.

8. Тест на утилизацию лизина, лунка № 8

   • Положительная реакция: изменение цвета с оливково-зелёного на светло- или тёмно-фиолетовый.
   • Отрицательная реакция: жёлтая окраска среды.

9. Тесты ферментации углеводов, лунки № 9–12

   • Положительная реакция: изменение окраски на жёлтую.
   • Отрицательная реакция: красная окраска или отсутствие изменения цвета.

Таблица интерпретации результатов

Идентификационный индекс видов Escherichia

Обозначения: «+» — положительная реакция более чем у 90 % штаммов; «−» — отрицательная реакция более чем у 90 % штаммов; «V» — вариабельная реакция у 11–89 % штаммов. Индекс составлен на основании результатов лабораторных исследований и стандартных литературных источников.

| Тест | Метиловый красный | Фогес — Проскауэр | Утилизация цитрата | Индол | Глюкуронидаза | Нитрат | ONPG | Лизин | Лактоза | Глюкоза | С