HiMedia KB010-10KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (10 наборов)

Микробиологический набор для идентификации HiMedia KB010-10KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (10 наборов) — стандартизированная колориметрическая система с 12 биохимическими тестами. Набор предназначен для идентификации и дифференциации Escherichia coli из чистой культуры; непосредственное исследование клинических образцов не допускается.

Назначение и принцип работы

KB010 — стандартизированная колориметрическая система идентификации, включающая восемь традиционных биохимических тестов и четыре теста на утилизацию углеводов. Система предназначена для идентификации и дифференциации Escherichia coli с использованием чистого изолята.

Escherichia coli — грамотрицательные коккобациллярные палочки, ферментирующие лактозу, которые часто выделяются из клинических и неклинических образцов.

Принцип тестов основан на изменении pH и утилизации субстратов. После инкубации метаболические изменения Escherichia coli проявляются изменением окраски среды — спонтанно или после добавления реагента.

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре (M001), или на дифференциальной среде, например на агаре МакКонки (M082).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона для сердечно-мозговой инфузии (BHI) (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет 0,1 OD при 620 нм или значения 0,5 по стандарту МакФарланда. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируйте до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
3. Альтернативный вариант подготовки инокулята: отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,1 OD при 620 нм.

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Допускается альтернативный способ инокуляции: прокалывание каждой отдельной лунки петлёй с инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии со стандартами, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 6 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Подробная интерпретация по лункам

1. Тест на метиловый красный, лунка № 1

   • Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007).
   • Положительная реакция: появление красной окраски.
   • Желтовато-оранжевая окраска: отрицательная реакция.

2. Тест Фогеса—Проскауэра, лунка № 2

   • Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
   • Положительная реакция: появление розово-красной окраски через 5–10 мин.
   • Отсутствие изменения окраски или медная окраска вследствие реакции реагентов A и B: отрицательная реакция.

3. Тест на утилизацию цитрата, лунка № 3

   • Положительная реакция: изменение окраски на синюю.
   • Зелёная окраска или отсутствие изменения окраски: отрицательная реакция.

4. Индольный тест, лунка № 4

   • Добавьте 2–3 капли реагента Ковача (R008).
   • Положительная реакция: появление розово-красного кольца.
   • Отсутствие красного кольца: отрицательная реакция.

5. Тест на глюкуронидазу, лунка № 5

   • Бесцветная среда становится голубовато-зелёной: положительная реакция.
   • Бесцветная среда без изменения окраски: отрицательная реакция.

6. Тест на восстановление нитратов, лунка № 6

   • Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
   • Появление розово-красной окраски: положительная реакция.
   • Бесцветная среда: отрицательная реакция.

7. Тест ONPG, лунка № 7

   • Изменение окраски бесцветной среды на жёлтую: положительная реакция.
   • Бесцветная среда без изменения окраски: отрицательная реакция.

8. Тест на утилизацию лизина, лунка № 8

   • Изменение окраски от оливково-зелёной до светло- или тёмно-фиолетовой: положительная реакция.
   • Жёлтая окраска среды: отрицательная реакция.

9. Тесты ферментации углеводов, лунки № 9–12

   • Изменение окраски на жёлтую: положительная реакция.
   • Красная окраска или отсутствие изменения окраски: отрицательная реакция.

Таблица интерпретации результатов