HiMedia KB010-10KT Набор для идентификации E. coli HiE. coli (10 наборов)

Набор для идентификации E. coli HiE. coli (KB010-10KT) производства HiMedia представляет собой стандартизированную колориметрическую систему, включающую восемь биохимических и четыре углеводных теста. Применяется для идентификации и дифференциации чистых изолятов Escherichia coli на основе анализа метаболических изменений и утилизации субстратов.

Принцип измерения

Идентификация основана на принципе изменения pH и утилизации специфических субстратов. В процессе инкубации E. coli вызывают метаболические изменения, которые проявляются в виде изменения цвета среды. В некоторых случаях изменение цвета происходит спонтанно, в других — после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на общей среде (например, питательный агар M001) или дифференциальной среде (например, агар МакКонки M082).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности 0,1 OD при 620 нм или 0,5 по стандарту МакФарланда. При необходимости увеличьте время инкубации до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. В асептических условиях откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите по 50 мкл подготовленного инокулята в каждую лунку методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно идентификационному индексу. Реагенты в лунки № 1, 2, 4 и 6 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Детальная процедура оценки

Сводная таблица интерпретации

Идентификационный индекс различных видов Escherichia

Условные обозначения:

• +: Положительная реакция (более 90 % штаммов)
• −: Отрицательная реакция (более 90 % штаммов)
• V: Вариабельная реакция (11–89 % штаммов)

Технические характеристики

• Состав набора:
  • Стерильные среды в лунках для тестов: метиловый красный, Фогеса-Проскауэра, утилизация цитрата, индол, глюкуронидаза, восстановление нитратов, ONPG, утилизация лизина, а также 4 теста на утилизацию углеводов (лактоза, глюкоза, сахароза, сорбит).
  • Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
  • Реагенты: индикатор метилового красного (I007), реагент Баритта А (R029), реагент Баритта B (R030), реагент Ковакса (R008), сульфаниловая кислота 0,8 % (R015), N,N-диметил-1-нафтиламин (R009).
  • Документация: техническая вставка, таблица интерпретации результатов, лист регистрации данных, идентификационный индекс.
• Тип образца: чистый изолят из клинических или неклинических проб.
• Условия хранения: при получении хранить при температуре 2–8 °C.
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками.

Ограничения применения

• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры после извлечения из холодильника.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «$\pm$» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или особенностей используемых сред для изоляции и культивирования.
• Ложноотрицательные результаты могут быть получены при плотности инокулята ниже 0,1 OD.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.
• Набор не предназначен для прямого использования с клиническими образцами; требуется предварительное выделение чистой культуры на соответствующих средах.

Безопасность и утилизация

• Меры предосторожности: Только для профессионального использования in vitro. Использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица). Соблюдать правила асептики при инокуляции.
• Утилизация: После использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции с последующим сжиганием или автоклавированием в специальных пакетах согласно лабораторным протоколам работы с инфекционным материалом.

Комплект поставки

Набор поставляется в вариантах на 5, 10 или 20 тестов (в данной модификации — 10 наборов). Включает все необходимые среды, реагенты и документацию, указанные в разделе «Технические характеристики».

Дополнительно требуются (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Среды для обогащения и изоляции.