HiMedia KB009C-5KT Набор HiCarbo - Часть C (5 наборов)

Набор питательной среды HiMedia KB009C-5KT Набор HiCarbo - Часть C (5 наборов) — часть C стандартизированной системы из 11 тестов на утилизацию сахаров и 1 контрольного теста. Набор применяется для определения биохимического профиля микроорганизмов и валидации лабораторных штаммов, но не предназначен для прямого исследования клинических образцов и требует использования чистых культур.

Назначение и состав системы

KB009 — тест-система для изучения биохимического профиля широкого спектра микроорганизмов и валидации известных лабораторных штаммов.

Система включает 35 тестов на утилизацию углеводов:

• часть A — 12 тестов на утилизацию углеводов;
• часть B — 12 тестов на утилизацию углеводов;
• часть C — 11 тестов на утилизацию сахаров и 1 контрольный тест.

Система KB009 выпускается как полный набор, а также отдельными частями A, B1 и C.

Принцип измерения

Каждый набор HiCarbohydrate™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации, основанную на 35 тестах утилизации углеводов. Тесты используют изменение pH и утилизацию субстрата. Во время инкубации метаболические изменения, происходящие в микроорганизмах, вызывают самопроизвольное изменение цвета питательной среды.

Комплект поставки и состав

1. Каждый набор содержит материалы, достаточные для проведения 10 тестов.
2. 10 наборов части A (KB009A): лактоза, ксилоза, мальтоза, фруктоза, декстроза, галактоза, раффиноза, трегалоза, мелибиоза, сахароза, L-арабиноза, манноза.
3. 10 наборов части B1 (KB009B1): инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцит, инозитол, сорбитол, маннитол, адонитол, арабитол, эритритол, α-метил-D-глюкозид.
4. 10 наборов части C (KB009C): рамноза, целлобиоза, мелезитоза, α-метил-D-маннозид, ксилитол, ONPG, эскулин, D-арабиноза, цитрат, малонат, сорбоза и 1 контрольный тест.
5. Техническая инструкция по применению.
6. Таблица интерпретации результатов и бланк для регистрации результатов.

Подготовка посевного материала

KB009 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Идентифицируемые микроорганизмы предварительно выделяют и очищают; для анализа используют только чистые культуры.

Подготовка культуры на агаризованной среде

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (M001/M1274) или агаре для инфузии мозга и сердца (M211).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона для инфузии мозга и сердца.
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность посевного материала не достигнет значения не менее 0,5 OD при 620 нм.
4. Для некоторых требовательных микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В таком случае продолжайте инкубацию до достижения мутности 0,5 OD при 620 нм.

Альтернативная подготовка суспензии

1. Отберите 1–3 хорошо изолированные колонии.
2. Приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
3. Плотность суспензии должна составлять 0,5 OD при 620 нм.

Важные условия подготовки посевного материала

• При мутности посевного материала менее 0,5 OD возможны ошибочные ложноотрицательные результаты.
• Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры, а не суспензии.

Внесение посевного материала

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного посевного материала методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую отдельную лунку можно инокулировать погружением петли с посевным материалом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35 ± 2 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют по таблице интерпретации результатов.

Тест ферментации углеводов

• При положительной реакции цвет среды изменяется с красного на жёлтый вследствие образования кислоты.
• При отрицательной реакции среда остаётся красной.

Тест ONPG

• При положительной реакции цвет среды изменяется с бесцветного на жёлтый.
• При отрицательной реакции среда остаётся бесцветной.

Гидролиз эскулина

• При положительной реакции цвет среды изменяется с кремового на чёрный.
• При отрицательной реакции среда остаётся кремовой.

Утилизация цитрата

• При положительной реакции цвет среды изменяется с желтовато-зелёного на синий.
• При отрицательной реакции среда остаётся желтовато-зелёной.

Утилизация малоната

• При положительной реакции цвет среды изменяется со светло-зелёного на синий.
• При отрицательной реакции среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации

1. В тесте ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В этом случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию ещё 48 ч. Оранжевый цвет после 48 ч инкубации интерпретируют как отрицательную реакцию.
2. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутаций или из-за особенностей среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.

Меры предосторожности

• Клинические образцы и микробные культуры следует считать потенциально патогенными и обращаться с ними соответствующим образом.
• Во время инокуляции и работы с наборами необходимо соблюдать асептические условия.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы, а также инструменты, применявшиеся для выделения и инокуляции, включая пипетки и петли, необходимо обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством, после чего утилизировать сжиганием или автоклавированием в пакете для утилизации.

Хранение и срок годности

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Условие при получении: 2–8 °C.