HiMedia KB009C-20KT Набор HiCarbohydrate - Часть C (20 наборов)

Набор HiCarbohydrate - Часть C (KB009C-20KT) производства HiMedia для изучения биохимического профиля микроорганизмов. Система включает 11 тестов на утилизацию сахаров и 1 контрольный тест, основанных на принципе изменения pH среды.

Принцип измерения

Система HiCarbohydrate™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации. Тесты базируются на принципе утилизации субстрата и последующем изменении pH среды. В процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, что проявляется в виде спонтанного изменения цвета индикатора в среде.

Состав набора

Набор KB009C-20KT содержит материалы для проведения 20 тестов (по 10 тестов в каждом из двух комплектов части C). В состав части C входят следующие тесты:

• Рамноза
• Целлобиоза
• Мелезитоза
• $\alpha$-метил-D-маннозид
• Ксилитол
• ONPG
• Эскулин
• D-арабиноза
• Цитрат
• Малонат
• Сорбоза
• 1 контрольный тест

В комплект также входят технический вкладыш, таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать непосредственно для анализа клинических образцов; микроорганизмы должны быть предварительно изолированы и очищены. Допускается использование только чистых культур.

1. Изолируйте микроорганизм на стандартной среде, например, на питательном агаре (M001/M1274) или агаре с инфузией мозга и сердца (M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона с инфузией мозга и сердца и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\ge$ 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: приготовьте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Важно: при плотности инокулята ниже 0,5 OD возможны ошибочные ложноотрицательные результаты. Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Инокуляция и инкубация

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения. Альтернативно возможен метод инокуляции путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.
3. Инкубируйте при температуре 35 $\pm$ 2 °C в течение 18–24 часов.

Интерпретация результатов

Оценка реакций

• Ферментация углеводов: положительная реакция — изменение цвета среды с красного на жёлтый (за счёт продукции кислоты); отрицательная — среда остаётся красной.
• Тест ONPG: положительная реакция — изменение цвета с бесцветного на жёлтый; отрицательная — среда остаётся бесцветной.
• Гидролиз эскулина: положительная реакция — изменение цвета с кремового на чёрный; отрицательная — среда остаётся кремовой.
• Утилизация цитрата: положительная реакция — изменение цвета с жёлто-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся жёлто-зелёной.
• Утилизация малоната: положительная реакция — изменение цвета со светло-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации

• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат фиксируется как «+», и инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет после 48 часов считается отрицательной реакцией.
• Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при температуре +2…+8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Меры предосторожности: клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные. Соблюдайте строгие асептические условия при инокуляции.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть продезинфицированы с последующим сжиганием или автоклавированием в специальных пакетах.