HiMedia KB009B1-5KT Набор HiCarbo - Часть B (5 наборов)

Набор HiMedia KB009B1-5KT HiCarbo — часть B для биохимической идентификации микроорганизмов, включающая 12 тестов на утилизацию углеводов. Набор применяют для изучения биохимического профиля выделенных чистых культур и валидации известных лабораторных штаммов; инкубация проводится при 35 ± 2 °C в течение 18–24 ч.

Назначение и состав системы

KB009 — комплексная тест-система для изучения биохимического профиля широкого спектра микроорганизмов и валидации известных лабораторных штаммов.

Полная система включает 35 тестов на утилизацию углеводов:

• часть A — 12 тестов на утилизацию углеводов;
• часть B — 12 тестов на утилизацию углеводов;
• часть C — 11 тестов на утилизацию сахаров и 1 контрольный тест.

KB009 выпускается как полный набор, а также по отдельным частям: A, B1 и C.

Принцип измерения

Набор HiCarbohydrate™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации, основанную на 35 тестах утилизации углеводов. Тесты используют изменение pH и утилизацию субстрата: во время инкубации в микроорганизмах происходят метаболические изменения, которые проявляются самопроизвольным изменением цвета питательной среды.

Состав набора

Каждый набор содержит материалы для проведения 10 тестов.

В инструкции для системы KB009 указаны следующие составные части:

• 10 наборов части A (KB009A): лактоза, ксилоза, мальтоза, фруктоза, декстроза, галактоза, раффиноза, трегалоза, мелибиоза, сахароза, L-арабиноза, манноза;
• 10 наборов части B1 (KB009B1): инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцитол, инозитол, сорбитол, маннитол, адонитол, арабитол, эритритол, α-метил-D-глюкозид;
• 10 наборов части C (KB009C): рамноза, целлобиоза, мелецитоза, α-метил-D-маннозид, ксилитол, ONPG, эскулин, D-арабиноза, цитрат, малонат, сорбоза и 1 контрольный тест;
• техническая инструкция по применению;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов.

Инструкция по применению

Подготовка инокулята

1. Набор KB009 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, предварительно выделяют и очищают. Используют только чистые культуры.
2. Выделите исследуемый микроорганизм на стандартной питательной среде, например на питательном агаре (M001/M1274) или агаре с мозгово-сердечным экстрактом (M211).
3. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона с мозгово-сердечным экстрактом и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет значения ≥ 0,5 OD при 620 нм.
4. Для некоторых требовательных микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируйте культуру до достижения мутности инокулята 0,5 OD при 620 нм.
5. Альтернативный способ подготовки инокулята: отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,5 OD при 620 нм.

Важные замечания по подготовке инокулята

• При мутности инокулята менее 0,5 OD можно получить ошибочные ложноотрицательные результаты.
• Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры, а не суспензии.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностной инокуляции.
4. Альтернативно каждую лунку можно инокулировать прокалыванием петлёй, смоченной инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35 ± 2 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с таблицей интерпретации результатов.

Ферментация углеводов

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с красного на жёлтый вследствие образования кислоты.
• Отрицательная реакция: среда остаётся красной.

Тест ONPG

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с бесцветного на жёлтый.
• Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.

Гидролиз эскулина

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с кремового на чёрный.
• Отрицательная реакция: среда остаётся кремовой.

Утилизация цитрата

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с желтовато-зелёного на синий.
• Отрицательная реакция: среда остаётся желтовато-зелёной.

Утилизация малоната

• Положительная реакция: цвет среды изменяется со светло-зелёного на синий.
• Отрицательная реакция: среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации

1. В тесте ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию в течение 48 ч. Оранжевую окраску после 48 ч инкубации интерпретируют как отрицательную реакцию.
2. В некоторых случаях микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутации либо из-за особенностей среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.

Меры предосторожности

• Клинические образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные и обращаться с ними с соблюдением соответствующих требований биобезопасности.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо поддерживать асептические условия.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы, а также инструменты, применявшиеся для выделения и инокуляции, включая пипетки и петли, необходимо обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством, после чего утилизировать сжиганием или автоклавированием в пакете для утилизации.

Условия хранения и срок годности

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: питательная среда / тест-система
• Количество тестов в одном наборе: 10
• Полная система: 35 тестов на утилизацию углеводов
• Часть B1: 12 тестов на утилизацию углеводов
• Температура инкубации: 35 ± 2 °C
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч
• Объём инокулята на одну лунку: 50 мкл
• Требуемая плотность инокулята: 0,5 OD при 620 нм
• Температура хранения: 2–8 °C
• Срок годности: 12 месяцев

Комплект поставки

• Набор HiMedia KB009B1-5KT HiCarbo — часть B, 5 наборов.
• Техническая инструкция по применению.
• Таблица интерпретации результатов.
• Лист регистрации результатов.