HiMedia KB009A-5KT Набор HiCarbo - Часть A (5 наборов)

Набор для биохимического анализа HiCarbo — Часть A (KB009A-5KT) производства HiMedia. Система предназначена для изучения биохимического профиля различных микроорганизмов и валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система HiCarbohydrate™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации, основанную на определении способности микроорганизмов утилизировать конкретные углеводы. Принцип работы базируется на изменении pH среды: в процессе метаболизма микроорганизмов происходят химические изменения, которые приводят к спонтанной смене цвета индикатора в среде.

Область применения

Набор используется для идентификации микроорганизмов по их биохимическим свойствам, в частности, по способности ферментировать определенные сахара и использовать специфические источники углерода. Применяется в микробиологических и диагностических лабораториях.

Состав набора (Часть A)

Набор KB009A содержит материалы для проведения 10 тестов по следующим 12 углеводам:

• Лактоза
• Ксилоза
• Мальтоза
• Фруктоза
• Декстроза
• Галактоза
• Раффиноза
• Трегалоза
• Мелибиоза
• Сахароза
• L-арабиноза
• Манноза

В комплект также входят:

• Технический вкладыш с описанием продукта.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB009 нельзя использовать напрямую для анализа клинических образцов. Микроорганизмы должны быть предварительно изолированы и очищены. Допускается использование только чистых культур.

1. Изолируйте микроорганизм на стандартной среде, например, на питательном агаре (M001/M1274) или агаре Brain Heart Infusion (M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\ge$ 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора с плотностью 0,5 OD при 620 нм.

Важно:

• При плотности инокулята ниже 0,5 OD возможны ошибочные ложноотрицательные результаты.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии обеспечивает более выраженные результаты.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативно возможен метод инокуляции путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35 $\pm$ 2 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Оценка реакций

• Ферментация углеводов: положительная реакция характеризуется изменением цвета среды с красного на жёлтый (из-за образования кислоты); отрицательная — среда остаётся красной.
• Тест ONPG: положительная реакция — изменение цвета с бесцветного на жёлтый; отрицательная — среда остаётся бесцветной.
• Гидролиз эскулина: положительная реакция — изменение цвета с кремового на чёрный; отрицательная — среда остаётся кремовой.
• Утилизация цитрата: положительная реакция — изменение цвета с жёлто-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся жёлто-зелёной.
• Утилизация маланона: положительная реакция — изменение цвета со светло-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации

• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат следует зафиксировать как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет после 48 часов инкубации интерпретируется как отрицательная реакция.
• Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Меры предосторожности: клинические образцы и культуры микроорганизмов следует рассматривать как потенциально патогенные. Соблюдайте строгие асептические условия при работе с наборами.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть продезинфицированы подходящим средством, после чего утилизированы путём сжигания или автоклавирования в специальных пакетах.