HiMedia KB009A-20KT Набор HiCarbohydrate - Часть A (20 наборов)

Набор HiCarbohydrate - Часть A (KB009A-20KT) производства HiMedia представляет собой стандартизированную колориметрическую систему для изучения биохимического профиля микроорганизмов. Система основана на определении способности организмов утилизировать 12 видов углеводов с изменением pH среды.

Принцип измерения

Идентификация основана на принципе утилизации субстрата и последующем изменении pH среды. В процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, что проявляется в виде спонтанного изменения цвета индикатора в питательной среде.

Область применения

Набор используется для изучения биохимических свойств широкого спектра микроорганизмов, а также для валидации известных лабораторных штаммов. Система позволяет проводить дифференциацию бактерий по способности усваивать конкретные углеводы.

Состав набора

Данная модификация (Часть A) включает материалы для проведения 20 наборов тестов (по 10 тестов в каждом). В состав входят тесты на утилизацию следующих углеводов:

• Лактоза
• Ксилоза
• Мальтоза
• Фруктоза
• Декстроза
• Галактоза
• Раффиноза
• Трегалоза
• Мелибиоза
• Сахароза
• L-арабиноза
• Манноза

Также в комплект входят:

• Технический вкладыш с описанием продукта.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать напрямую для анализа клинических образцов; микроорганизмы должны быть предварительно изолированы и очищены. Допускается использование только чистых культур.

1. Изолируйте целевой организм на общей среде, например, на питательном агаре (M001/M1274) или агаре Brain Heart Infusion (M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\ge$ 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до плотности 0,5 OD при 620 нм.

Примечание: при плотности инокулята ниже 0,5 OD возможны ошибочные ложноотрицательные результаты. Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Инокуляция и инкубация

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.
4. Инкубируйте при температуре 35 $\pm$ 2 °C в течение 18–24 часов.

Интерпретация результатов

Оценка реакций

• Ферментация углеводов: положительная реакция — изменение цвета среды с красного на жёлтый (за счёт образования кислоты); отрицательная — среда остаётся красной.
• Тест ONPG: положительная реакция — изменение цвета с бесцветного на жёлтый; отрицательная — среда остаётся бесцветной.
• Гидролиз эскулина: положительная реакция — изменение цвета с кремового на чёрный; отрицательная — среда остаётся кремовой.
• Утилизация цитрата: положительная реакция — изменение цвета с жёлто-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся жёлто-зелёной.
• Утилизация малоната: положительная реакция — изменение цвета со светло-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся светло-зелёной.

Сводная таблица интерпретации

Особенности интерпретации

• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет после 48 часов инкубации считается отрицательной реакцией.
• Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Меры предосторожности: клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные. При инокуляции строго соблюдать асептику.
• Утилизация: использованные наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы, после чего утилизированы путём сжигания или автоклавирования в специальных пакетах.

Технические характеристики

• Назначение: биохимическая идентификация микроорганизмов
• Количество тестов в наборе: 20 наборов по 12 углеводов (Часть A)
• Температура инкубации: 35 $\pm$ 2 °C
• Время инкубации: 18–24 часа
• Требуемая плотность инокулята: 0,5 OD при 620 нм