HiMedia KB009A-10KT Набор HiCarbohydrate - Часть A (10 наборов)

Набор для биохимического анализа HiMedia KB009A-10KT HiCarbohydrate (Часть A), состоящий из 10 комплектов для определения утилизации 12 видов углеводов. Применяется для изучения биохимического профиля различных микроорганизмов и валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система HiCarbohydrate™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации. Тесты основаны на принципе изменения pH среды при утилизации субстрата: в процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, что проявляется в виде спонтанного изменения цвета среды.

Состав набора

Набор KB009A содержит материалы, достаточные для проведения 10 тестов по каждому из следующих 12 углеводов:

• Лактоза
• Ксилоза
• Мальтоза
• Фруктоза
• Декстроза
• Галактоза
• Раффиноза
• Трегалоза
• Мелибиоза
• Сахароза
• L-арабиноза
• Манноза

В комплект также входят: технический вкладыш, таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB009 нельзя использовать непосредственно для клинических образцов; микроорганизмы должны быть предварительно изолированы и очищены. Допускается использование только чистых культур.

1. Изолируйте целевой микроорганизм на стандартной среде, например, на питательном агаре (M001/M1274) или агаре Brain Heart Infusion (M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\ge$ 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Важные примечания:

• Если мутность инокулята ниже 0,5 OD, возможны ошибочные ложноотрицательные результаты.
• При использовании обогащенной культуры вместо суспензии результаты выражены более отчетливо.

Инокуляция и инкубация

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.
4. Инкубируйте при температуре 35 $\pm$ 2 °C в течение 18–24 часов.

Интерпретация результатов

Оценка реакций

• Ферментация углеводов: положительная реакция — изменение цвета среды с красного на жёлтый (из-за образования кислоты); отрицательная — среда остаётся красной.
• Тест ONPG: положительная реакция — изменение цвета с бесцветного на жёлтый; отрицательная — среда остаётся бесцветной.
• Гидролиз эскулина: положительная реакция — изменение цвета с кремового на чёрный; отрицательная — среда остаётся кремовой.
• Утилизация цитрата: положительная реакция — изменение цвета с жёлто-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся жёлто-зелёной.
• Утилизация малалоната: положительная реакция — изменение цвета со светло-зелёного на синий; отрицательная — среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации

• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет после 48 часов инкубации интерпретируется как отрицательная реакция.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при температуре +2…+8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Меры предосторожности: клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные. Соблюдайте строгие асептические условия при инокуляции.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы с последующим сжиганием или автоклавированием в пакетах для утилизации.