HiMedia KB009-5KT Набор HiCarbo (5 наборов)

Набор для идентификации микроорганизмов HiCarbo (5 наборов) HiMedia KB009-5KT представляет собой систему из 35 тестов на утилизацию углеводов. Применяется для анализа клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система HiCarbo™ основана на колориметрическом методе идентификации, использующем 35 тестов на утилизацию углеводов. Принцип работы базируется на изменении pH среды при метаболизме субстратов микроорганизмами, что сопровождается спонтанным изменением цвета индикатора в среде.

Область применения

Набор предназначен для работы с чистыми изолятами, полученными из клинических и неклинических образцов. Используется в микробиологических лабораториях для видового определения бактерий.

Состав набора

Каждый набор KB009-5KT содержит материалы для проведения 5 тестов, включающие:

• Часть A: тесты на лактозу, ксилозу, мальтозу, фруктозу, декстрозу, галактозу, раффинозу, трегалозу, мелибиозу, сахарозу, L-арабинозу, маннозу.
• Часть B: тесты на инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцитол, инозитол, сорбитол, маннитол, адонитол, арабитол, эритритол, $\alpha$-метил-D-глюкозид.
• Часть C: тесты на рамнозу, целлобиозу, мелезитозу, $\alpha$-метил-D-маннозид, ксилитол, ONPG, эскулин, D-арабинозу, цитрат, малонат, сорбитол и 1 контрольный тест.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать напрямую для клинических образцов; требуется предварительное выделение и очистка культуры.

1. Выделите микроорганизм на стандартной среде, например, питательном агаре (M001, M1274) или агаре BHI (M211).
2. Способ А: перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения оптической плотности 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено.
3. Способ Б: приготовьте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативно возможен метод инокуляции путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35 $\pm$ 2 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Оценка по типам тестов

1. Утилизация углеводов (Часть A, B; лунки 1–5, 8, 11 части C):
   • Положительный результат: изменение цвета на жёлтый.
   • Отрицательный результат: красный цвет или отсутствие изменений.
2. Тест ONPG (лунка 6 части C):
   • Положительный результат: изменение с бесцветного на жёлтый.
   • Отрицательный результат: среда остаётся бесцветной.
3. Гидролиз эскулина (лунка 7 части C):
   • Положительный результат: изменение цвета с кремового на чёрный.
   • Отрицательный результат: среда остаётся кремовой.
4. Утилизация цитрата (лунка 9 части C):
   • Положительный результат: изменение с зелёного на синий.
   • Отрицательный результат: среда остаётся зелёной.
5. Утилизация малоната (лунка 10 части C):
   • Положительный результат: изменение со светло-зелёного на синий.
   • Отрицательный результат: среда остаётся светло-зелёной.

Сводная таблица интерпретации

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 35
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35 $\pm$ 2 °C
• Время инкубации: 18–24 часа
• Требуемая плотность инокулята: 0,5 OD при 620 нм
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с лунками

Ограничения и предостережения

• Реагенты необходимо довести до комнатной температуры после извлечения из холодильника.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ошибочные ложноотрицательные результаты возможны при плотности инокулята ниже 0,5 OD.
• Не использовать напрямую для клинических образцов без предварительного выделения чистой культуры.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при получении: +2…+8 °C.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы, затем уничтожены путем сжигания или автоклавирования в специальных пакетах.

Дополнительное оборудование

Для работы с набором требуются (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные и изоляционные среды.