HiMedia KB009-20KT Набор HiCarbohydrate (20 наборов)

Набор для идентификации микроорганизмов HiCarbohydrate (KB009-20KT) производства HiMedia состоит из 20 комплектов, включающих 35 тестов на утилизацию углеводов. Применяется для анализа клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система HiCarbo™ представляет собой стандартизированную колориметрическую систему идентификации. В основе тестов лежит принцип изменения pH среды при утилизации субстрата: в процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, что вызывает спонтанную смену цвета индикатора в среде.

Область применения

Набор предназначен для работы с чистыми изолятами, полученными из клинических и неклинических проб. Не может быть использован напрямую для анализа клинического материала; требуется предварительное выделение и очистка культур.

Состав набора

Каждый из 20 наборов включает три части (A, B и C), содержащие по 0,8 мл среды в каждой лунке:

Часть A

Лактоза, ксилоза, мальтоза, фруктоза, декстроза, галактоза, раффиноза, трегалоза, мелибиоза, сахароза, L-арабиноза, манноза.

Часть B

Инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцитол, инозитол, сорбитол, маннитол, адонитол, арабитол, эритритол, $\alpha$-метил-D-глюкозид.

Часть C

Рамноза, целлобиоза, мелезитоза, $\alpha$-метил-D-маннозид, ксилитол, ONPG, эскулин, D-арабиноза, цитрат, малонат, сорбитоза и 1 контрольная лунка.

Дополнительно в комплекте:

• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте микроорганизм на общей среде, например, на питательном агаре (M001 / M1274) или агаре BHI (M211).
2. Способ 1: Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята 0,5 OD при 620 нм (для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено).
3. Способ 2: Подготовьте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод посева путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35 $\pm$ 2 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Оценка реакций

1. Тесты на утилизацию углеводов (Часть A, B и лунки 1–5, 8, 11 части C):
   • Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
   • Отрицательная реакция: цвет остаётся красным или розовым.
2. Тест ONPG (лунка 6 части C):
   • Положительная реакция: изменение с бесцветного на жёлтый.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.
3. Гидролиз эскулина (лунка 7 части C):
   • Положительная реакция: изменение цвета с кремового на чёрный.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся кремовой.
4. Утилизация цитрата (лунка 9 части C):
   • Положительная реакция: изменение цвета с зелёного на синий.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся зелёной.
5. Утилизация малоната (лунка 10 части C):
   • Положительная реакция: изменение цвета со светло-зелёного на синий.
   • Отрицательная реакция: среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Технические характеристики и ограничения

• Требования к инокуляту: при мутности менее 0,5 OD возможны ложноотрицательные результаты.
• Особенности интерпретации: при слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Влияние факторов: возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.
• Рекомендация: использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при получении поместить в холодильник при температуре 2–8 °C.
• Подготовка: перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы, затем уничтожены путем сжигания или автоклавирования.

Дополнительное оборудование

Для работы с набором требуются (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные и изоляционные среды.