HiMedia KB009-10KT Набор HiCarbohydrate (10 наборов)

Набор для биохимической идентификации HiMedia HiCarbohydrate KB009-10KT (10 наборов) представляет собой систему из 35 тестов на утилизацию углеводов. Применяется для идентификации микроорганизмов из клинических и неклинических образцов, а также для валидации известных лабораторных штаммов.

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом методе идентификации. В основе лежит принцип изменения pH среды при утилизации субстрата: в процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, что приводит к спонтанному изменению цвета индикатора в среде.

Область применения

Набор предназначен для работы с чистыми изолятами, полученными из клинических и неклинических проб. Не может быть использован непосредственно для анализа клинического материала; требуется предварительное выделение и очистка культур на общих средах (например, питательный агар M001, питательный агар для определения оксидазы M1274 или агар BHI M211).

Состав набора

Каждый комплект (на 10 тестов) включает:

• Часть A: тесты на лактозу, ксилозу, мальтозу, фруктозу, декстрозу, галактозу, раффинозу, трегалозу, мелибиозу, сахарозу, L-арабинозу, маннозу.
• Часть B: тесты на инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцитол, инозитол, сорбитол, маннитол, адонитол, арабитол, эритритол, $\alpha$-метил-D-глюкозид.
• Часть C: тесты на рамнозу, целлобиозу, мелезитозу, $\alpha$-метил-D-маннозид, ксилитол, ONPG, эскулин, D-арабинозу, цитрат, малонат, сорбитозу и 1 контрольный тест.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Дополнительно требуемые материалы (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарландела.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные или изоляционные среды.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте микроорганизм на соответствующей среде.
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности 0,5 OD при 620 нм. Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Инокуляция

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативно возможна инокуляция путем погружения петли с инокулятом в каждую лунку.

Инкубация

• Температура: 35 $\pm$ 2 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Общие правила

• Тесты на утилизацию углеводов (Часть A, B; Часть C лунки 1–5, 8, 11):
  • Положительный результат: изменение цвета на жёлтый.
  • Отрицательный результат: красный цвет или отсутствие изменений.
• Тест ONPG (Часть C, лунка 6):
  • Положительный результат: изменение с бесцветного на жёлтый.
  • Отрицательный результат: среда остаётся бесцветной.
• Гидролиз эскулина (Часть C, лунка 7):
  • Положительный результат: изменение цвета с кремового на чёрный.
  • Отрицательный результат: среда остаётся кремовой.
• Утилизация цитрата (Часть C, лунка 9):
  • Положительный результат: изменение с зелёного на синий.
  • Отрицательный результат: среда остаётся зелёной.
• Утилизация малоната (Часть C, лунка 10):
  • Положительный результат: изменение со светло-зелёного на синий.
  • Отрицательный результат: среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Технические характеристики

• Количество тестов в наборе: 35
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с лунками
• Температура инкубации: 35 $\pm$ 2 °C
• Время инкубации: 18–24 часа
• Условия хранения при получении: 2–8 °C

Ограничения и предостережения

• Перед использованием реагенты должны быть доведены до комнатной температуры.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «+» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ошибочные ложноотрицательные результаты могут быть получены, если мутность инокулята ниже 0,5 OD.
• Результаты более выражены при использовании обогащенной культуры вместо суспензии.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Утилизация

После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть продезинфицированы подходящим средством, затем утилизированы путем сжигания или автоклавирования в специальных пакетах для отходов в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.