HiMedia KB009-10KT Набор HiCarbohydrate (10 наборов)

Набор питательных сред HiMedia KB009-10KT HiCarbohydrate (10 наборов) для выполнения 35 тестов утилизации углеводов. Набор применяется для идентификации микроорганизмов из клинических и не клинических образцов после предварительного выделения чистой культуры и не используется непосредственно с клиническими образцами.

Назначение

HiMedia KB009-10KT предназначен для определения способности микроорганизмов утилизировать углеводы и проведения биохимической идентификации чистых изолятов из клинических и не клинических образцов. Набор также может использоваться для валидации известных лабораторных штаммов.

KB009 доступен в виде полного набора, а также отдельно в виде частей A, B и C.

Идентификация продукта

Наименование продукта	Набор HiCarbo™
Артикул	KB009

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 комплектов частей A, B и C KB009; количество материала рассчитано соответственно на выполнение 5, 10 или 20 тестов. Для HiMedia KB009-10KT используется комплектация на 10 наборов.

Часть A

Набор HiCarbo™ — часть A содержит следующие тесты:

• Лактоза
• Ксилоза
• Мальтоза
• Фруктоза
• Декстроза
• Галактоза
• Рафиноза
• Трегалоза
• Мелибиоза
• Сахароза
• L-арабиноза
• Манноза

Часть B

Набор HiCarbo™ — часть B содержит следующие тесты:

• Инулин
• Глюконат натрия
• Глицерин
• Салицин
• Дульцит
• Инозит
• Сорбит
• Маннит
• Адонит
• Арабит
• Эритрит
• α-метил-D-глюкозид

Часть C

Набор HiCarbo™ — часть C содержит следующие тесты и один контроль:

• Рамноза
• Целлобиоза
• Мелезитоза
• α-метил-D-маннозид
• Ксилит
• ONPG
• Эскулин
• D-арабиноза
• Цитрат
• Малонат
• Сорбоза
• 1 контроль

Документация

В комплект входят:

• техническая инструкция по применению;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли;
• пипетки;
• обогатительная среда или среда для выделения культуры.

Принцип измерения

Каждый набор HiCarbo™ представляет собой стандартизованную колориметрическую систему идентификации, включающую 35 тестов утилизации углеводов. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстрата. Во время инкубации метаболические изменения, происходящие в микроорганизмах, проявляются спонтанным изменением цвета среды.

Тип образца

Для анализа используют чистый изолят, полученный из клинического или не клинического образца.

KB009 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, необходимо предварительно выделить и очистить; используются только чистые культуры.

Подготовка инокулята

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре (M001), питательном агаре для определения оксидазной реакции (M1274) или агаре BHI (M211).
2. Отберите одну изолированную колонию и внесите её в 5 мл бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет 0,5 OD при 620 нм.
4. Некоторые требовательные микроорганизмы могут требовать инкубации более 6 ч. В этом случае продолжайте инкубацию до достижения мутности инокулята 0,5 OD при 620 нм.

Альтернативный способ подготовки инокулята:

1. Отберите 1–3 хорошо изолированные колонии.
2. Приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
3. Плотность суспензии должна составлять 0,5 OD при 620 нм.

Внесение инокулята

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы набор можно инокулировать прокалыванием каждой отдельной лунки инокуляционной петлёй с набранным инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35 °C ± 2 °C
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с таблицей интерпретации результатов.

Утилизация углеводов

Тесты утилизации углеводов выполняются в лунках 1–12 частей A и B, а также в лунках 1–5, 8 и 11 части C.

• Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
• Отрицательная реакция: красный цвет или отсутствие изменения цвета.

Тест ONPG

Тест ONPG выполняется в лунке 6 части C.

• Положительная реакция: изменение цвета среды с бесцветного на жёлтый.
• Отрицательная реакция: среда остаётся бесцветной.

Гидролиз эскулина

Тест выполняется в лунке 7 части C.

• Положительная реакция: изменение цвета среды с кремового на чёрный.
• Отрицательная реакция: среда остаётся кремовой.

Утилизация цитрата

Тест выполняется в лунке 9 части C.

• Положительная реакция: изменение цвета среды с зелёного на синий.
• Отрицательная реакция: среда остаётся зелёной.

Утилизация малоната

Тест выполняется в лунке 10 части C.

• Положительная реакция: изменение цвета среды со светло-зелёного на синий.
• Отрицательная реакция: среда остаётся светло-зелёной.

Таблица интерпретации результатов

Тест	Принцип	Исходный цвет среды	Положительная реакция	Отрицательная реакция
Утилизация углеводов	Определение утилизации углеводов	Розовато-красный / красный	Жёлтый	Красный / розовый
ONPG	Определение активности β-галактозидазы	Бесцветный	Жёлтый	Бесцветный
Гидролиз эскулина	Определение гидролиза эскулина	Кремовый	Чёрный	Кремовый
Утилизация цитрата	Определение способности микроорганизма использовать цитрат как единственный источник углерода	Зелёный	Синий	Зелёный
Утилизация малоната	Определение способности микроорганизма использовать малонат натрия как единственный источник углерода	Светло-зелёный	Синий	Светло-зелёный

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска:

• часть A содержит 12 лунок с 12 тестами утилизации углеводов;
• часть B содержит 12 лунок с 12 тестами утилизации углеводов;
• часть C содержит 11 тестов и 1 контроль.

Состав частей

Часть A: лактоза, ксилоза, мальтоза, фруктоза, декстроза, галактоза, рафиноза, трегалоза, мелибиоза, сахароза, L-арабиноза, манноза.

Часть B: инулин, глюконат натрия, глицерин, салицин, дульцит, инозит, сорбит, маннит, адонит, арабит, эритрит, α-метил-D-глюкозид.

Часть C: рамноза, целлобиоза, мелезитоза, α-метил-D-маннозид, ксилит, ONPG, эскулин, D-арабиноза, цитрат, малонат, сорбоза и 1 контроль.

Объём среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл

Проверка стерильности

Продукт соответствует критериям выпуска по стерильности.

Хранение и срок годности

• Температура хранения после получения: 2–8 °C
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке
• Условия хранения: хранить в холодильнике при 2–8 °C
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Перед началом работы после извлечения из холодильника реагентам необходимо дать нагреться до комнатной температуры.

Ограничения и возможные источники ошибок

1. В тестах ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае реакцию регистрируют как положительную (+) и продолжают инкубацию до 48 ч.
2. Оранжевый цвет после 48 ч инкубации интерпретируют как отрицательную реакцию.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутаций или из-за среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных источников и результатов тестов, выполненных в лаборатории.
5. Ложноотрицательные результаты возможны при мутности инокулята менее 0,5 OD.
6. Реакции становятся более выраженными при использовании обогащённой культуры вместо суспензии.
7. Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Идентифицируемые микроорганизмы должны быть предварительно выделены на подходящих средах для выделения; используются только чистые культуры.

Требования безопасности

Набор предназначен для диагностики in vitro и профессионального применения.

• Перед вскрытием упаковки прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образ