HiMedia KB007-10KT Набор для идентификации Vibrio HiVibrio (10 наборов)

Набор для идентификации Vibrio HiVibrio HiMedia KB007-10KT представляет собой биохимическую систему из 12 тестов для определения видов бактерий рода Vibrio из клинических и неклинических образцов. Применяется для анализа чистых изолятов грамположительных каталаза-положительных палочек, являющихся возбудителями холеры; в комплект входит 10 наборов для проведения тестов.

Принцип измерения

Система KB007 основана на использовании двенадцати стандартных колориметрических биохимических тестов. Определение базируется на принципе изменения pH среды и утилизации субстратов: в процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются в виде изменения цвета среды (спонтанно или после добавления специфических реагентов).

Область применения

Набор предназначен для идентификации чистых культур Vibrio из клинических и неклинических проб. Не может быть использован напрямую для анализа клинического материала; микроорганизмы должны быть предварительно выделены на соответствующих селективных средах.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый организм на общей среде, например, на питательном агаре (M001) или агаре BHI (M211).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл щелочной пептон-воды (M618) или бульона BHI (M210).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята $\ge 0,5$ OD при 620 нм (некоторым организмам может потребоваться более 6 часов).
4. Альтернативный метод: приготовьте гомогенную суспензию из 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до достижения плотности 0,5 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного нанесения.
3. Альтернативный метод: инокуляция путем прокалывания каждой лунки петлёй с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно идентификационному индексу, прилагаемому к набору. Реагенты в лунку № 1 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Особенности оценки по тестам:

• Тест Вогеса-Проскауэра (лунка № 1): добавьте 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030). Положительная реакция — появление розово-красного цвета через 5–10 минут. Отсутствие изменений или медный цвет — отрицательная реакция.
• Утилизация аргинина (лунка № 2): положительная реакция — изменение цвета на пурпурный/темно-пурпурный; желтый цвет — отрицательная реакция.
• Солеустойчивость (лунка № 3): положительная реакция — рост с изменением цвета на красно-пурпурный; красно-пурпурный цвет без роста — отрицательная реакция.
• ONPG (лунка № 4): положительная реакция — изменение цвета на желтый; бесцветная среда — отрицательная реакция.
• Утилизация цитрата (лунка № 5): положительная реакция — изменение цвета на синий; зеленый цвет — отрицательная реакция.
• Утилизация орнитина (лунка № 6): положительная реакция — изменение цвета на пурпурный/темно-пурпурный; желтый цвет — отрицательная реакция.
• Утилизация углеводов (лунки № 7–12): положительная реакция — изменение цвета на желтый; красный/розовый цвет — отрицательная реакция.

Технические характеристики

Сводная таблица интерпретации

Общие параметры

• Количество среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками.
• Температура хранения при получении: 2–8 °C.

Комплект поставки

• Наборы KB007 (количество согласно модификации: 5/10/20 тестов).
• Технический вкладыш.
• Идентификационный индекс.
• Реагент Баритта A (R029) для VP-теста.
• Реагент Баритта B (R030) для VP-теста.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Дополнительное оборудование и материалы

Для работы с набором требуются (не входят в комплект):

• Стандарт МакФарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные / изоляционные среды.

Ограничения и предостережения

• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат фиксируется как «$\pm$», инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ошибочные ложноотрицательные результаты возможны, если мутность инокулята ниже 0,5 OD.
• Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.
• Возможны противоречивые результаты вследствие мутаций микроорганизмов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.