HiMedia KB005A-20KT Набор для идентификации стрептококков HiStrep (20 наборов)

Набор для идентификации стрептококков HiStrep HiMedia KB005A-20KT (20 наборов) представляет собой стандартизированную колориметрическую систему из 12 биохимических тестов. Применяется для дифференциации видов Streptococcus из клинических и неклинических образцов с использованием чистых изолятов.

Принцип измерения

Система основана на использовании двенадцати традиционных биохимических тестов, работа которых базируется на принципе изменения pH и утилизации субстратов. В процессе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются в виде изменения цвета среды (спонтанно или после добавления специфического реагента).

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB005A не предназначен для прямого использования с клиническим материалом; микроорганизмы должны быть предварительно изолированы на подходящих средах. Допускается использование только чистых культур.

1. Изолируйте организм на стандартной среде, например, на питательном агаре (M001) или агаре с триптоном и соей (M290).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или стандарта 0,5 по Макфарланду. При необходимости увеличьте время инкубации до достижения указанной оптической плотности.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию 1–3 хорошо изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физраствора до достижения плотности 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно возможен метод инокуляции путем прокалывания каждой лунки петлей с инокулятом.

Инкубация

• Температура: 35 ± 2 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно идентификационному индексу. Реагенты в лунки №1 и №3 добавляются строго по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Оценка по отдельным тестам

• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка №1): Добавьте 2–3 капли реагента Baritt A (R029) и 1 каплю реагента Baritt B (R030). Положительная реакция: появление розово-красного цвета через 5–10 минут. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или появление медного оттенка.
• Гидролиз эскулина (лунка №2): Положительная реакция: изменение цвета среды с кремового на черный. Отрицательная реакция: цвет не меняется.
• Тест на PYR (лунка №3): Добавьте 1–2 капли PYR-реагента (R043). Положительная реакция: появление и сохранение вишнево-красного цвета. Отрицательная реакция: розовый, оранжевый или желтый цвет.
• ONPG (лунка №4): Положительная реакция: изменение цвета с бесцветного на желтый. Отрицательная реакция: цвет не меняется.
• Утилизация аргинина (лунка №5): Положительная реакция: изменение цвета с оливково-зеленого/светло-пурпурного на темно-пурпурный. Отрицательная реакция: отсутствие изменений или желтый цвет.
• Ферментация углеводов (лунки №6–12): Положительная реакция: изменение цвета на желтый. Отрицательная реакция: красный цвет или отсутствие изменений.

Технические характеристики

Общие параметры

• Назначение: идентификация видов Streptococcus
• Количество тестов в наборе: 20
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Температура инкубации: 35 ± 2 °C
• Время инкубации: 18–24 часа
• Условия хранения при получении: 2–8 °C

Сводная таблица тестов

Идентификационный индекс видов Streptococcus

Условные обозначения:

• + : 90–100 % штаммов дают реакцию
• [+] : 76–89 % штаммов
• d : 26–75 % штаммов
• [-] : 11–25 % штаммов
• - : 0–10 % штаммов
• nd : не определено (not detected)
• v : вариабельная реакция

Комплект поставки

• Стерильные среды в лунках для тестов: Фогеса-Проскауэра, гидролиза эскулина, PYR, ONPG, утилизации аргинина и 7 тестов на утилизацию углеводов (глюкоза, лактоза, арабиноза, сахароза, сорбитол, маннит, раффиноза).
• Реагент Baritt A (R029) для VP-теста.
• Реагент Baritt B (R030) для VP-теста.
• PYR-реагент (R043) для PYR-теста.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Ограничения и предостережения

• Температурный режим: Перед использованием реагенты должны прогреться до комнатной температуры после извлечения из холодильника.
• Слабые реакции: При ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию (записывается как $\pm$). В таких случаях инкубацию продлевают до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Погрешности: Возможны ложноотрицательные результаты, если мутность инокулята ниже 0,1 OD. Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.
• Мутации: В отдельных случаях возможны противоречивые результаты из-за мутаций или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования