HiMedia KB004-5KT Набор для идентификации стафилококков HiStaph (5 наборов)

Набор для идентификации стафилококков HiMedia KB004-5KT HiStaph (5 наборов) — стандартизованная цветометрическая система с 12 биохимическими тестами для идентификации и дифференциации рода Staphylococcus. Набор предназначен для анализа чистых изолятов из клинических и неклинических образцов и не применяется непосредственно для исследования исходного клинического материала.

Назначение

KB004 HiStaph — стандартизованная цветометрическая система идентификации, включающая 12 традиционных биохимических тестов:

• реакция Фогеса—Проскауэра;
• фосфатазный тест;
• тест ONPG;
• выявление продукции уреазы;
• утилизация аргинина;
• утилизация углеводов: маннита, сахарозы, лактозы, арабинозы, рафинозы, трегалозы и мальтозы.

Система используется для идентификации и дифференциации рода Staphylococcus при работе с чистыми изолятами, полученными из клинических и неклинических образцов.

Принцип измерения

Метод основан на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды. Цветовая реакция может быть видна непосредственно или проявляться после добавления соответствующего реагента.

Состав набора

Каждый набор содержит комплекты KB004 в количестве 5, 10 или 20 штук в зависимости от исполнения; материала достаточно для проведения соответственно 5, 10 или 20 тестов.

Стерильная среда в каждом комплекте предназначена для проведения:

1. теста Фогеса—Проскауэра;
2. фосфатазного теста;
3. теста ONPG;
4. теста на продукцию уреазы;
5. теста на утилизацию аргинина;
6. теста на утилизацию маннита;
7. теста на утилизацию сахарозы;
8. теста на утилизацию лактозы;
9. теста на утилизацию арабинозы;
10. теста на утилизацию рафинозы;
11. теста на утилизацию трегалозы;
12. теста на утилизацию мальтозы.

В комплект также входят:

• техническая инструкция к продукту;
• реактив Баритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра;
• реактив Баритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра;
• индекс идентификации;
• таблица интерпретации результатов;
• бланк регистрации результатов.

Материалы, необходимые, но не входящие в комплект

• 40%-ный раствор гидроксида натрия для фосфатазного теста;
• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли и пипетки;
• обогатительная или изолирующая питательная среда.

Тип образца

Чистый изолят из клинического или неклинического образца.

Подготовка образца и посевной суспензии

Вариант с предварительным обогащением культуры

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре M001 или триптиказо-соевом агаре M290.
2. Возьмите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл сердечно-мозгового бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность посевной суспензии не достигнет оптической плотности 0,1 при 620 нм или значения 0,5 по стандарту Мак-Фарланда.
3. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируйте суспензию до достижения оптической плотности 0,1 при 620 нм.

Альтернативный вариант подготовки суспензии

1. Возьмите 1–3 хорошо изолированные колонии.
2. Приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
3. Плотность суспензии должна соответствовать оптической плотности 0,1 при 620 нм.

Методика инокуляции набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленной посевной суспензии методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй с посевным материалом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации.

Реактивы в лунки № 1 и № 2 добавляют в конце инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для следующих тестов:

1. реакция Фогеса—Проскауэра;
2. фосфатазный тест;
3. ONPG;
4. продукция уреазы;
5. утилизация аргинина;
6. утилизация маннита;
7. утилизация сахарозы;
8. утилизация лактозы;
9. утилизация арабинозы;
10. утилизация рафинозы;
11. утилизация трегалозы;
12. утилизация мальтозы.

Объём среды

Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Реакция Фогеса—Проскауэра: лунка № 1

1. Добавьте 2–3 капли реактива Баритта A (R029) и 1 каплю реактива Баритта B (R030).
2. Положительная реакция: розовато-красное окрашивание появляется через 5–10 мин.
3. Отсутствие изменения окраски или появление медного цвета вследствие реакции между реактивами A и B указывает на отрицательную реакцию.

Фосфатазный тест: лунка № 2

1. Добавьте 1–2 капли 40%-ного раствора гидроксида натрия.
2. Положительная реакция: ярко-розовое окрашивание появляется в течение нескольких секунд.
3. При отрицательной реакции реактив остаётся бесцветным.

Тест ONPG: лунка № 3

• Положительная реакция: жёлтое окрашивание.
• Отрицательная реакция: отсутствие окрашивания, среда остаётся бесцветной.

Тест на уреазу: лунка № 4

• Положительная реакция: розовое окрашивание.
• Отрицательная реакция: оранжево-жёлтое окрашивание.

Тест на утилизацию аргинина: лунка № 5

• Положительная реакция: фиолетовое или тёмно-фиолетовое окрашивание.
• Отрицательная реакция: жёлтое окрашивание.

Тесты на утилизацию углеводов: лунки № 6–12

• Положительная реакция: жёлтое окрашивание.
• Отрицательная реакция: красное или розовое окрашивание.

Таблица интерпретации результатов

Ограничения и мешающие факторы

1. После извлечения из холодильника доведите реагенты до комнатной температуры.
2. При проведении теста на ферментацию углев