HiMedia KB004-20KT Набор для идентификации стафилококков HiStaph (20 наборов)

Набор для идентификации стафилококков HiMedia KB004-20KT HiStaph (20 наборов) — стандартизированная колориметрическая система с 12 биохимическими тестами. Набор предназначен для идентификации и дифференциации рода Staphylococcus из клинических и неклинических образцов с использованием чистой культуры; непосредственно для исследования клинических образцов без предварительного выделения микроорганизмов не применяется.

Назначение и принцип работы

Назначение

HiMedia KB004-20KT предназначен для идентификации и дифференциации микроорганизмов рода Staphylococcus из клинических и неклинических образцов. Для анализа используют чистую выделенную культуру.

Система представляет собой стандартизированный колориметрический набор, включающий 12 традиционных биохимических тестов:

• реакция Фогеса—Проскауэра;
• фосфатазный тест;
• тест ONPG;
• тест на образование уреазы;
• тест на утилизацию аргинина;
• тесты на утилизацию углеводов: маннита, сахарозы, лактозы, арабинозы, раффинозы, трегалозы и мальтозы.

Принцип измерения

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстрата. При инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды; цвет может быть виден непосредственно или появляется после добавления реагента.

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 комплектов KB004, достаточных для проведения соответственно 5, 10 или 20 тестов. Комплект стерильных сред включает лунки для:

1. реакции Фогеса—Проскауэра;
2. фосфатазного теста;
3. теста ONPG;
4. определения образования уреазы;
5. определения утилизации аргинина;
6. утилизации маннита;
7. утилизации сахарозы;
8. утилизации лактозы;
9. утилизации арабинозы;
10. утилизации раффинозы;
11. утилизации трегалозы;
12. утилизации мальтозы.

В комплект входят:

1. Стерильные тест-системы KB004.
2. Техническая инструкция.
3. Реагент Баритт A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра.
4. Реагент Баритт B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра.
5. Индекс идентификации.
6. Таблица интерпретации результатов.
7. Лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

1. 40%-ный раствор гидроксида натрия для фосфатазного теста.
2. Стандарт Мак-Фарланда.
3. Инокуляционные петли.
4. Пипетки.
5. Среда обогащения или среда для выделения культуры.

Тип образца и пробоподготовка

Тип образца

Чистая выделенная культура из клинического или неклинического образца.

Подготовка инокулята

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (M001) или триптиказо-соевом агаре (M290).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или соответствия стандарту Мак-Фарланда 0,5. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В таком случае продолжайте инкубацию до достижения мутности 0,1 OD при 620 нм.
3. Альтернативный способ подготовки инокулята: отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,1 OD при 620 нм.

Методика проведения анализа

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую отдельную лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй с захваченным инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 1 и 2 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для:

1. реакции Фогеса—Проскауэра;
2. фосфатазного теста;
3. теста ONPG;
4. определения образования уреазы;
5. определения утилизации аргинина;
6. утилизации маннита;
7. утилизации сахарозы;
8. утилизации лактозы;
9. утилизации арабинозы;
10. утилизации раффинозы;
11. утилизации трегалозы;
12. утилизации мальтозы.

• Количество среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Проверка стерильности: соответствует критериям выпуска.

Реакции в лунках

Реакция Фогеса—Проскауэра, лунка № 1

• Добавьте 2–3 капли реагента Баритт A (R029) и 1 каплю реагента Баритт B (R030).
• Положительная реакция: появление розовато-красного окрашивания через 5–10 мин.
• Отсутствие изменения цвета или медное окрашивание, обусловленное реакцией реагентов A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Фосфатазный тест, лунка № 2

• Добавьте 1–2 капли 40%-ного раствора гидроксида натрия.
• Положительная реакция: появление ярко-розового окрашивания в течение нескольких секунд.
• При отрицательной реакции реагент остаётся бесцветным.

Тест ONPG, лунка № 3

• Положительная реакция: жёлтое окрашивание.
• Отрицательная реакция: отсутствие окрашивания, раствор остаётся бесцветным.

Тест на уреазу, лунка № 4

• Положительная реакция: розовое окрашивание.
• Отрицательная реакция: оранжево-жёлтое окрашивание.

Утилизация аргинина, лунка № 5

• Положительная реакция: фиолетовое или тёмно-фиолетовое окрашивание.
• Отрицательная реакция: жёлтое окрашивание.

Утилизация углеводов, лунки № 6–12

• Положительная реакция: жёлтое окрашивание.
• Отрицательная реакция: красное или розовое окрашивание.

Таблица интерпретации результатов

Ограничения и мешающие факторы

1. После извлечения из холодильника доведите реагенты до комнатной температуры.
2. При тестировании ферментации углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае зарегистрируйте результат как ± и продолжите инкубацию максимум до 48 ч. Оранжевое окрашивание после 48 ч инкубации интерпретируйте