Набор для идентификации HiStaph HiMedia KB004-10KT

Набор для идентификации HiStaph HiMedia KB004-10KT — стандартизированная колориметрическая система для идентификации стафилококков по 12 биохимическим тестам. Набор применяется для дифференциации рода Staphylococcus из клинических и неклинических образцов с использованием чистой культуры; прямое исследование клинических образцов не допускается.

Назначение

KB004 — стандартизированная колориметрическая система идентификации, включающая 12 традиционных биохимических тестов для идентификации и дифференциации рода Staphylococcus из клинических образцов и образцов неклинического происхождения с использованием чистого изолята.

Система основана на изменении pH и утилизации субстратов. В процессе инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, проявляющиеся изменением окраски среды — визуально непосредственно или после добавления реагента.

Исследуемый материал

• Тип образца: чистый изолят из клинического или неклинического образца.
• Прямое исследование клинических образцов: не допускается.
• Перед идентификацией микроорганизмы необходимо выделить на подходящей изоляционной среде.
• Для анализа используют только чистые культуры.
• Сведения о сборе и обращении с образцами: см. раздел «Методика проведения анализа».

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 комплектов KB004, рассчитанных соответственно на выполнение 5, 10 или 20 тестов. Стерильные среды в комплектах предназначены для проведения следующих исследований:

• тест Фогеса—Проскауэра;
• тест на фосфатазу;
• тест ONPG;
• тест на образование уреазы;
• тест на утилизацию аргинина;
• тесты на утилизацию семи углеводов: маннита, сахарозы, лактозы, арабинозы, раффинозы, трегалозы и мальтозы.

В комплект входят:

1. Комплекты KB004 в количестве, соответствующем варианту поставки: 5, 10 или 20 тестов.
2. Техническая инструкция.
3. Реагент Baritt A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра.
4. Реагент Baritt B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра.
5. Индекс идентификации.
6. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.

Принцип измерения

KB004 использует колориметрический принцип идентификации. Двенадцать биохимических тестов основаны на выявлении изменения pH и утилизации субстратов. После инкубации метаболическая активность микроорганизмов вызывает изменение цвета среды, которое может быть видимым непосредственно либо проявляется после добавления соответствующего реагента.

Материалы, необходимые, но не входящие в комплект

• 40%-ный раствор гидроксида натрия для теста на фосфатазу.
• Стандарт Мак-Фарланда.
• Инокуляционные петли.
• Пипетки.
• Обогатительная среда или изоляционная среда.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (Nutrient Agar, M001) или триптон-соевом агаре (Tryptone Soya Agar, M290).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI (BHI Broth, M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или значения 0,5 по стандарту Мак-Фарланда. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае продолжайте инкубацию до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
3. В качестве альтернативы приготовьте инокулят, отобрав 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовив однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Оптическая плотность суспензии должна составлять 0,1 OD при 620 нм.

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать проколом, используя петлю с инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 1 и 2 добавляйте в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для следующих тестов:

1. тест Фогеса—Проскауэра;
2. тест на фосфатазу;
3. тест ONPG;
4. тест на образование уреазы;
5. тест на утилизацию аргинина;
6. тест на утилизацию маннита;
7. тест на утилизацию сахарозы;
8. тест на утилизацию лактозы;
9. тест на утилизацию арабинозы;
10. тест на утилизацию раффинозы;
11. тест на утилизацию трегалозы;
12. тест на утилизацию мальтозы.

Количество среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

• Результат: соответствует критериям выпуска.

Интерпретация результатов

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 1 и 2 добавляйте в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 1

1. Добавьте 2–3 капли реагента Baritt A (R029) и 1 каплю реагента Baritt B (R030).
2. Положительная реакция: появление розовато-красной окраски через 5–10 мин.
3. Отсутствие изменения окраски или медная окраска, возникающая вследствие реакции реагентов A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Тест на фосфатазу: лунка № 2

1. Добавьте 1–2 капли 40%-ного раствора гидроксида натрия.
2. Положительная реакция: появление ярко-розовой окраски в течение нескольких секунд.
3. При отрицательной реакции реагент остаётся бесцветным.

Тест ONPG: лунка № 3

• Положительная реакция: жёлтая окраска.
• Отрицательная реакция: отсутствие окраски.

Тест на уреазу: лунка № 4

• Положительная реакция: розовая окраска.
• Отрицательная реакция: оранжево-жёлтая окраска.

Тест на утилизацию аргинина: лунка № 5

• Положительная реакция: фиолетовая или тёмно-фиолетовая окраска.
• Отрицательная реакция: жёлтая окраска.

Тесты на утилизацию углеводов: лунки № 6–12

• Положительная реакция: жёлтая окраска.
• Отрицательная реакция: красная или розовая окраска.

Таблица интерпретации результатов