HiMedia KB003-5KT Набор для идентификации энтеробактерий Hi25 (5 наборов)

Набор для идентификации энтеробактерий HiMedia KB003-5KT Hi25 (5 наборов) — стандартизированная колориметрическая система на основе 25 тестов. Набор предназначен для идентификации видов Enterobacteriaceae из клинических и не клинических образцов с использованием чистой культуры; непосредственное исследование клинических образцов не допускается.

Назначение

KB003 Hi25 — стандартизированная колориметрическая система идентификации энтеробактерий, включающая 25 тестов:

• 13 традиционных биохимических тестов;
• 11 тестов утилизации углеводов;
• отдельный тест на оксидазу с использованием диска с реагентом.

Система предназначена для идентификации энтеробактерий из клинических и не клинических образцов. Для анализа используют только предварительно выделенные и очищенные чистые культуры.

Принцип идентификации

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. Во время инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды — самопроизвольно или после добавления соответствующего реагента.

Тест на оксидазу выполняют отдельно с помощью диска с реагентом на оксидазу, входящего в комплект.

Состав набора

Каждый набор содержит материалы для выполнения 5 тестов и включает:

1. 5 комплектов части I.
2. 5 комплектов части II.
3. Диски с реагентом на оксидазу DD018.
4. Техническую инструкцию.
5. Таблицу интерпретации результатов и бланк внесения результатов.
6. Индекс идентификации.
7. Реагент TDA R036 для теста на фенилаланиндезаминазу.
8. Реагент Баритта A R029 для теста Фогеса—Проскауэра.
9. Реагент Баритта B R030 для теста Фогеса—Проскауэра.
10. Индикатор метилового красного I007 для теста с метиловым красным.
11. Реагент Ковача R008 для индольного теста.
12. Сульфаниловую кислоту R015 для теста на восстановление нитрата.
13. Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина R009 для теста на восстановление нитрата.

Материалы, необходимые, но не входящие в комплект

• Стандарт мутности Мак-Фарланда.
• Инокуляционные петли.
• Пипетки.
• Обогащающая среда или среда для выделения культуры.

Подготовка инокулята

1. KB003 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, предварительно выделяют и очищают. Используют только чистые культуры.
2. Выделяют микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре M001, питательном агаре для теста на оксидазу M1274 или на дифференциальной среде, например агаре МакКонки M082.
3. Отбирают одну изолированную колонию, инокулируют в 5 мл бульона BHI M210 и инкубируют при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет 0,1 OD при 620 нм или значения 0,5 по стандарту Мак-Фарланда. Для некоторых требовательных микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируют до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
4. В качестве альтернативы инокулят готовят из 1–3 хорошо изолированных колоний, приготавливая однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,1 OD при 620 нм.
5. Выполняют тест на оксидазу для исследуемого микроорганизма с использованием диска с реагентом на оксидазу DD018, входящего в комплект.
6. Хорошо изолированную колонию переносят на один диск с оксидазным реагентом и растирают по поверхности диска.
7. Положительная реакция: интенсивное фиолетовое окрашивание в течение 10 с.
8. Замедленная положительная реакция: изменение цвета через 10–60 с.
9. Отрицательная реакция: окрашивание появляется позднее чем через 60 с или отсутствует.
10. Результат заносят в бланк внесения результатов.
11. Тест на оксидазу является обязательной частью системы идентификации и необходим для дифференциации Enterobacteriaceae от других грамотрицательных палочек.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор в асептических условиях.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностной инокуляции.
4. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать прокалыванием с помощью петли, содержащей инокулят.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии со стандартами, приведёнными в индексе идентификации.

В лунки № 5, 6, 9, 10 и 11 полоски 1 реагенты добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч. При выполнении контроля качества реагенты также добавляют в конце периода инкубации через 18–24 ч.

Технические характеристики

• Тип изделия: среда, стандартизированная колориметрическая система идентификации.
• Количество тестов: 25.
• Количество наборов в упаковке: 5.
• Количество полосок: 2 стерильные белые непрозрачные полоски.
• Количество лунок в каждой полоске: 12.
• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Тип исследуемого материала: чистый изолят из клинического или не клинического образца.
• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Время инкубации: 18–24 ч.
• Условия хранения при получении: 2–8 °C.
• Стерильность: соответствует критериям выпуска.

Контроль качества

Внешний вид и содержимое полосок

Две стерильные белые непрозрачные полоски содержат по 12 лунок каждая.

Полоска 1 содержит стерильные среды для следующих тестов:

• ONPG;
• утилизация лизина;
• утилизация орнитина;
• выявление уреазы;
• дезаминирование фенилаланина, TDA;
• восстановление нитрата;
• образование H₂S;
• утилизация цитрата;
• тест Фогеса—Проскауэра;
• тест с метиловым красным;
• индольный тест;
• утилизация малоната.

Полоска 2 содержит:

• тест на гидролиз эскулина;
• 11 тестов утилизации углеводов: арабиноза, ксилоза, адонитол, рамноза, целлобиоза, мелибиоза, сахароза, раффиноза, трегалоза, глюкоза и лактоза.

Диск с реагентом на оксидазу предоставляется отдельно.

Количество среды

Объём среды: 0,8 мл в каждой лунке.

Проверка стерильности

Результат: соответствует критериям выпуска.

Реакции в полоске 1

Лунка № 1 — тест ONPG

• Изменение цвета с бесцветного на жёлтый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 2 — утилизация лизина

• Изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Лунка № 3 — утилизация орнитина

• Изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Лунка № 4 — тест на уреазу

• Изменение цвета на розовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 5 — тест на дезаминирование фенилаланина

1. Добавьте 2–3 капли реагента TDA R036.
2. Появление тёмно-зелёного цвета в течение 1 мин указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 6 — тест на восстановление нитрата

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015.
2. Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина R009.
3. Немедленное появление розовато-красного цвета после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 7 — образование H₂S

• Изменение цвета с оранжево-жёлтого на чёрный указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или слабая желтовато-коричневая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Лунка № 8 — утилизация цитрата

• Изменение цвета на синий указывает на положительную реакцию.
• Зелёная окраска или отсутствие изменения цвета указывают на отрицательную реакцию.

Лунка № 9 — тест Фогеса—Проскауэра

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A R029.
2. Добавьте 1 каплю реагента Баритта B R030.
3. Появление розовато-красного цвета через 5–10 мин указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения цвета или медная окраска, обусловленная взаимодействием реагентов A и B, указывают на отрицательную реакцию.

Лунка № 10 — тест с метиловым красным

1. Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного I007.
2. Появление красного цвета указывает на положительную реакцию.
3. Желтовато-оранжевая окраска указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 11 — индольный тест

1. Добавьте 2–3 капли реагента Ковача R008.
2. Появление розовато-красного кольца указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие красного кольца указывает на отрицательную реакцию.

Лунка № 12 — утилизация малоната

• Изменение цвета на синий указывает на положительную реакцию.
• Светло-зелёная окраска или отсутствие изменения цвета указывают на отрицательную реакцию.

Реакции в полоске 2

Лунка № 1 —