HiMedia KB003-20KT Набор для идентификации энтеробактерий Hi25 (20 наборов)

Набор для идентификации энтеробактерий HiMedia KB003-20KT Набор для идентификации энтеробактерий Hi25 (20 наборов) — стандартизированная колориметрическая система из 25 тестов для идентификации видов Enterobacteriaceae. Набор применяют с чистыми изолятами, полученными из клинических и не клинических образцов, при инкубации 35–37 °C в течение 18–24 ч; непосредственное внесение клинических образцов не допускается.

Назначение

KB003 — стандартизированная колориметрическая система идентификации, объединяющая 25 тестов для определения видов семейства Enterobacteriaceae из клинических и не клинических образцов с использованием чистого изолята.

Принцип идентификации

Набор Hi25 основан на 13 стандартных биохимических тестах и 11 тестах утилизации углеводов. Тесты используют изменения pH и утилизацию субстратов. В процессе инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением окраски среды — визуально или после добавления реагента.

Тест на оксидазу выполняют отдельно с использованием диска с реагентом на оксидазу, входящего в комплект. Оксидазный тест выявляет продукцию цитохромоксидазы и используется для дифференциации Enterobacteriaceae от других грамотрицательных палочек.

Комплект поставки

Каждый набор содержит материалы для выполнения 5, 10 или 20 тестов. Исполнение KB003-20KT рассчитано на 20 наборов тестирования.

1. 5, 10 или 20 комплектов части I.
2. 5, 10 или 20 комплектов части II.
3. Диски с реагентом на оксидазу DD018.
4. Техническая инструкция.
5. Таблица интерпретации результатов и бланк регистрации результатов.
6. Индекс идентификации.
7. Реагент TDA R036 для теста на фенилаланиндезаминазу.
8. Реагент Баритта A R029 для теста Фогеса—Проскауэра.
9. Реагент Баритта B R030 для теста Фогеса—Проскауэра.
10. Индикатор метилового красного I007 для теста с метиловым красным.
11. Реагент Ковача R008 для индольного теста.
12. Сульфаниловая кислота R015 для теста на восстановление нитратов.
13. Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина R009 для теста на восстановление нитратов.

Необходимые материалы, не входящие в комплект

1. Стандарт Мак-Фарланда.
2. Инокуляционные петли и пипетки.
3. Среда обогащения или изоляционная питательная среда.

Тип образца и пробоподготовка

Тип образца

Чистый изолят из клинического или не клинического образца.

Подготовка инокулята

1. Набор KB003 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, сначала изолируют и очищают. Используют только чистые культуры.
2. Выделяют микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (M001), на питательном агаре для оксидазного теста (M1274) либо на дифференциальной среде, например на агаре МакКонки (M082).
3. Отбирают одну изолированную колонию, вносят в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируют при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или соответствия стандарту Мак-Фарланда 0,5.
4. Для некоторых требовательных микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируют до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
5. В качестве альтернативы инокулят готовят из 1–3 хорошо изолированных колоний, приготовляя однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,1 OD при 620 нм.
6. Выполняют оксидазный тест с исследуемым микроорганизмом. Для теста используют диск с реагентом на оксидазу DD018, входящий в комплект.
7. Хорошо изолированную колонию втирают в один диск с реагентом на оксидазу.
8. Положительная реакция определяется по появлению интенсивно фиолетовой окраски в течение 10 с.
9. Изменение окраски через 10–60 с указывает на замедленную положительную реакцию.
10. Появление окраски позднее 60 с или отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.
11. Результат регистрируют в бланке регистрации результатов.
12. Оксидазный тест является обязательной частью системы идентификации. Тест необходим для дифференциации Enterobacteriaceae от других грамотрицательных палочек.

Методика проведения анализа

Внесение инокулята в набор

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую отдельную лунку можно инокулировать проколом инокуляционной петлёй с одной петлёй инокулята.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 5, 6, 9, 10 и 11 полоски 1 добавляют в конце инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества и внешний вид

Внешний вид

Две стерильные белые непрозрачные полоски по 12 лунок каждая.

Полоска 1 содержит стерильные среды для следующих тестов: ONPG, утилизация лизина, утилизация орнитина, выявление уреазы, дезаминирование фенилаланина (TDA), восстановление нитратов, образование H₂S, утилизация цитрата, тест Фогеса—Проскауэра, тест с метиловым красным, индольный тест и утилизация малоната.

Полоска 2 содержит тест на гидролиз эскулина и 11 тестов утилизации различных углеводов: арабинозы, ксилозы, адонитола, рамнозы, целлобиозы, мелибиозы, сахарозы, рафинозы, трегалозы, глюкозы и лактозы.

Диск с реагентом на оксидазу поставляется отдельно от полосок.

Количество среды

Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Интерпретация результатов при контроле качества

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Реакции в лунках

Часть I

Тест ONPG: лунка № 1

• Изменение окраски с бесцветной на жёлтую указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация лизина: лунка № 2

• Изменение окраски на фиолетовую или тёмно-фиолетовую указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Утилизация орнитина: лунка № 3

• Изменение окраски на фиолетовую или тёмно-фиолетовую указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Тест на уреазу: лунка № 4

• Изменение окраски на розовую указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Тест на дезаминирование фенилаланина: лунка № 5

• Добавьте 2–3 капли реагента TDA R036.
• Появление тёмно-зелёной окраски в течение 1 мин указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Тест на восстановление нитратов: лунка № 6

• Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015 и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина R009.
• Немедленное появление розовато-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Образование H₂S: лунка № 7

• Изменение оранжево-жёлтой окраски на чёрную указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски или появление слабой желтовато-коричневой окраски указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация цитрата: лунка № 8

• Изменение окраски на синюю указывает на положительную реакцию.
• Зелёная окраска или отсутствие изменения окраски указывают на отрицательную реакцию.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 9

• Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A R029 и 1 каплю реагента Баритта B R030.
• Появление розовато-красной окраски через 5–10 мин указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения окраски или медная окраска, обусловленная реакцией реагентов A и B, указывают на отрицательную реакцию.

Тест с метиловым красным: лунка № 10

• Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного I007.
• Появление красной окраски указывает на положительную реакцию.
• Желтовато-оранжевая окраска указывает на отрицательную реакцию.

Индольный тест: лунка № 11

• Добавьте 2–3 капли реагента Ковача R008.
• Появление розовато-красного кольца указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие красного кольца указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация малоната: лунка № 12

• Изменение окраски на син