HiMedia KB003-10KT Набор для идентификации энтеробактерий Hi25 (10 наборов)

Стандартизированная колориметрическая система идентификации энтеробактерий HiMedia KB003-10KT Hi25 (10 наборов), состоящая из 25 тестов для определения видов семейства Enterobacteriaceae. Применяется для анализа чистых изолятов из клинических и неклинических образцов на основе принципов изменения pH и утилизации субстратов.

Принцип измерения

Система Hi25™ основана на использовании 13 традиционных биохимических тестов и 11 тестов на утилизацию углеводов. В ходе инкубации микроорганизмы подвергаются метаболическим изменениям, которые проявляются в изменении цвета среды (спонтанно или после добавления специфического реагента). Тест на оксидазу проводится отдельно с использованием прилагаемых реагентных дисков.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KB003 не предназначен для прямого использования с клиническим материалом; требуется предварительное выделение и очистка культуры.

1. Изолируйте микроорганизм на общей среде (например, питательный агар M001 или питательный агар для оксидазы M1274) или дифференциальной среде (агар МакКонки M082).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 часов до достижения мутности 0,1 OD при 620 нм (или 0,5 по стандарту МакФарланда). Для требовательных организмов время инкубации может быть увеличено до достижения указанной плотности.
3. Альтернативно: приготовьте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора с плотностью 0,1 OD при 620 нм.

Тест на оксидазу

Проводится обязательно для дифференциации Enterobacteriaceae от других грамотрицательных палочек.

1. Нанесите изолированную колонию на один оксидазный диск (DD018).
2. Интерпретация:
   • Положительная реакция: появление темно-фиолетового цвета в течение 10 секунд.
   • Замедленная положительная реакция: изменение цвета в интервале 10–60 секунд.
   • Отрицательная реакция: отсутствие изменений или появление цвета спустя 60 секунд.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно: внесите инокулят в каждую лунку методом «укола» петлей.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 18–24 часа.

Интерпретация результатов

Добавление реагентов в лунки № 5, 6, 9, 10 и 11 первой полоски (Strip 1) производится строго по окончании инкубационного периода (через 18–24 часа).

Полоска I (Strip 1)

• Лунка 1 (ONPG): Бесцветный $\rightarrow$ Желтый (положительно).
• Лунка 2 (Лизин): Оливково-зеленый/светло-фиолетовый $\rightarrow$ Фиолетовый/темно-фиолетовый (положительно).
• Лунка 3 (Орнитин): Оливково-зеленый/светло-фиолетовый $\rightarrow$ Фиолетовый/темно-фиолетовый (положительно).
• Лунка 4 (Уреаза): Оранжево-желтый $\rightarrow$ Розовый (положительно).
• Лунка 5 (Деаминация фенилаланина): Добавить 2–3 капли реагента TDA (R036). Темно-зеленый цвет в течение 1 минуты (положительно).
• Лунка 6 (Восстановление нитратов): Добавить 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли N,N-диметил-1-нафтиламина (R009). Розово-красный цвет (положительно).
• Лунка 7 (Продукция H₂S): Оранжево-желтый $\rightarrow$ Черный (положительно).
• Лунка 8 (Утилизация цитрата): Зеленый $\rightarrow$ Синий (положительно).
• Лунка 9 (Voges-Proskauer): Добавить 2–3 капли реагента Баритта А (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030). Розово-красный цвет через 5–10 минут (положительно).
• Лунка 10 (Метиловый красный): Добавить 2–3 капли индикатора метилового красного (I007). Красный цвет (положительно).
• Лунка 11 (Индол): Добавить 2–3 капли реагента Ковакса (R008). Розово-красное кольцо (положительно).
• Лунка 12 (Утилизация малатоната): Светло-зеленый $\rightarrow$ Синий (положительно).

Полоска II (Strip 2)

• Лунка 1 (Гидролиз эскулина): Кремовый $\rightarrow$ Черный (положительно).
• Лунки 2–12 (Ферментация углеводов): Розово-красный/красный $\rightarrow$ Желтый (положительно).

Технические характеристики

Состав набора

Каждый набор содержит материалы для проведения 10 тестов:

• 10 комплектов Части I (Strip 1).
• 10 комплектов Части II (Strip 2).
• Оксидазные реагентные диски (DD018).
• Реагент TDA (R036) для теста на деаминацию фенилаланина.
• Реагент Баритта A (R029) для теста Voges-Proskauer.
• Реагент Баритта B (R030) для теста Voges-Proskauer.
• Индикатор метилового красного (I007).
• Реагент Ковакса (R008) для теста на индол.
• Сульфаниловая кислота (R015) для теста на нитраты.
• Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина (R009) для теста на нитраты.
• Технический вкладыш, таблица интерпретации результатов, лист записи данных и идентификационный индекс.

Параметры среды

• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Вид: две стерильные белые непрозрачные полоски по 12 лунок каждая.

Ограничения и предостережения

• Не использовать напрямую с клиническими образцами.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует пометить результат как «$\pm$» и инкубировать до 48 часов; оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным.
• Ошибочные ложноотрицательные результаты возможны при мутности инокулята ниже 0,1 OD.
• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение при получении: +2…+8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Таблицы интерпретации

Интерпретация результатов Полоски I

Интерпретация результатов Полоски II