HiMedia KB003-10KT Набор для идентификации энтеробактерий Hi25 (10 наборов)

Набор для идентификации энтеробактерий HiMedia KB003-10KT Hi25 — стандартизированная колориметрическая система из 25 биохимических тестов для работы с чистыми изолятами. HiMedia KB003-10KT применяется в микробиологических лабораториях для идентификации видов Enterobacteriaceae в клинических и неклинических образцах; непосредственное внесение клинического материала в набор не допускается.

Назначение

KB003 Hi25 — стандартизированная колориметрическая система идентификации, объединяющая 25 тестов для идентификации видов семейства Enterobacteriaceae из клинических и неклинических образцов с использованием чистого изолята.

Принцип идентификации

Набор Hi25 включает 13 традиционных биохимических тестов и 11 тестов на утилизацию углеводов. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстрата. В процессе инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды — спонтанно или после добавления реагента.

Тест на оксидазу выполняют отдельно с использованием диска с реагентом на оксидазу, входящего в комплект.

Тип образца

• Чистый изолят из клинического образца.
• Чистый изолят из неклинического образца.

Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы предварительно изолируют на подходящей среде, очищают и используют только чистые культуры.

Комплект поставки

Каждый комплект содержит материалы для проведения 5, 10 или 20 тестов. Для HiMedia KB003-10KT предусмотрены 10 наборов каждой части.

1. 5, 10 или 20 наборов части I.
2. 5, 10 или 20 наборов части II.
3. Диски с реагентом на оксидазу DD018.
4. Техническая инструкция к продукту.
5. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.
6. Индекс идентификации.
7. Реагент TDA R036 для теста на фенилаланиндезаминазу.
8. Реагент Баритта A R029 для теста Фогеса—Проскауэра.
9. Реагент Баритта B R030 для теста Фогеса—Проскауэра.
10. Индикатор метилового красного I007 для теста на метиловый красный.
11. Реагент Ковача R008 для индольного теста.
12. Сульфаниловая кислота R015 для теста на восстановление нитратов.
13. Реагент N,N-диметил-1-нафтиламина R009 для теста на восстановление нитратов.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

1. Стандарт Мак-Фарланда.
2. Инокуляционные петли и пипетки.
3. Среда обогащения или изоляционная питательная среда.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. KB003 нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы, подлежащие идентификации, предварительно изолируют и очищают. Используют только чистые культуры. Изолируют исследуемый микроорганизм на обычной среде, например на питательном агаре M001, на питательном агаре для теста на оксидазу M1274 или на дифференциальной среде, например на агаре МакКонки M082.
2. Отбирают одну изолированную колонию, инокулируют в 5 мл бульона BHI M210 и инкубируют при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или соответствия стандарту Мак-Фарланда 0,5. Для некоторых требовательных микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируют до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
3. В качестве альтернативы инокулят готовят, отбирая 1–3 хорошо изолированные колонии и приготавливая однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,1 OD при 620 нм.
4. Выполняют тест на оксидазу для исследуемого микроорганизма. Используют диск с реагентом на оксидазу DD018, входящий в комплект.
5. Хорошо изолированную колонию отбирают и растирают на одном диске с реагентом на оксидазу. Положительная реакция определяется по появлению интенсивно фиолетовой окраски в течение 10 с. Изменение окраски через 10–60 с указывает на замедленную положительную реакцию. Появление окраски после 60 с или отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.
6. Результат регистрируют в листе регистрации результатов. Тест на оксидазу является обязательной частью системы идентификации и должен выполняться для дифференциации Enterobacteriaceae от других грамотрицательных палочек.

Инокуляция набора

1. Вскрывают набор в асептических условиях.
2. Снимают герметизирующую фольгу.
3. Вносят в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностной инокуляции.
4. В качестве альтернативы набор можно инокулировать прокалыванием каждой отдельной лунки инокуляционной петлёй с инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с указаниями, приведёнными в индексе идентификации.

Реагенты в лунки № 5, 6, 9, 10 и 11 полоски 1 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч. При интерпретации результатов контроля реагенты также добавляют в конце периода инкубации — через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Две стерильные белые непрозрачные полоски по 12 лунок каждая.

Полоска 1 содержит стерильные среды для следующих тестов:

• ONPG;
• утилизация лизина;
• утилизация орнитина;
• выявление уреазы;
• дезаминирование фенилаланина, TDA;
• восстановление нитратов;
• образование H₂S;
• утилизация цитрата;
• тест Фогеса—Проскауэра;
• тест на метиловый красный;
• индольный тест;
• утилизация малоната.

Полоска 2 содержит тест на гидролиз эскулина и 11 тестов на утилизацию углеводов:

• арабиноза;
• ксилоза;
• адонитол;
• рамноза;
• целлобиоза;
• мелибиоза;
• сахароза;
• рафиноза;
• трегалоза;
• глюкоза;
• лактоза.

Диск с реагентом на оксидазу поставляется отдельно.

Количество среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

• Результат: соответствует критериям выпуска.

Реакции в части I

Тест ONPG, лунка № 1

• Изменение цвета с бесцветного на жёлтый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация лизина, лунка № 2

• Изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Утилизация орнитина, лунка № 3

• Изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или жёлтая окраска указывают на отрицательную реакцию.

Тест на уреазу, лунка № 4

• Изменение цвета на розовый указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Тест на дезаминирование фенилаланина, лунка № 5

1. Добавляют 2–3 капли реагента TDA R036.
2. Появление тёмно-зелёной окраски в течение 1 мин указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Тест на восстановление нитратов, лунка № 6

1. Добавляют 1–2 капли сульфаниловой кислоты R015.
2. Добавляют 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина R009.
3. Немедленное появление розовато-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Образование H₂S, лунка № 7

• Изменение оранжево-жёлтой окраски на чёрную указывает на положительную реакцию.
• Отсутствие изменения цвета или появление слабой желтовато-коричневой окраски указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация цитрата, лунка № 8

• Изменение цвета на синий указывает на положительную реакцию.
• Зелёная окраска или отсутствие изменения цвета указывают на отрицательную реакцию.

Тест Фогеса—Проскауэра, лунка № 9

1. Добавляют 2–3 капли реагента Баритта A R029.
2. Добавляют 1 каплю реагента Баритта B R030.
3. Появление розовато-красной окраски через 5–10 мин указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения цвета или появление медной окраски вследствие реакции реагентов A и B указывают на отрицательную реакцию.

Тест на метиловый красный, лунка № 10

1. Добавляют 2–3 капли индикатора метилового красного I007.
2. Появление красной окраски указывает на положительную реакцию.
3. Желтовато-оранжевая окраска указывает на отрицательную реакцию.

Индольный тест, лунка № 11

1. Добавляют 2–3 капли реагента Ковача R008.
2. Появление розовато-красного кольца указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие красного кольца указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация малоната, лунка № 12

• Изменение цвета на синий указывает на положительную реакцию.
• Светло-зелёная окраска или отсутствие изменения цвета указывают на отрицательную реакцию.

Реакции