HiMedia KB002-5KT Ассортиментный биохимический тест-набор HiAssorted (5 наборов)

Биохимический тест-набор HiMedia KB002-5KT Ассортиментный биохимический тест-набор HiAssorted (5 наборов) производства HiMedia предназначен для идентификации грамотрицательных палочек по 12 биохимическим тестам. Набор применяют для анализа чистых изолятов из клинических и не относящихся к клиническим образцов, но не используют непосредственно с клиническими образцами.

Назначение

KB002 — стандартизированная цветометрическая система идентификации грамотрицательных палочек, обычно оксидазоотрицательных и нитратположительных. Набор предназначен для идентификации микроорганизмов по результатам 12 традиционных биохимических тестов:

1. Утилизация цитрата.
2. Утилизация лизина.
3. Утилизация орнитина.
4. Обнаружение уреазной активности.
5. Декарбоксилирование фенилаланина.
6. Восстановление нитрата.
7. Образование H₂S.
8. Утилизация глюкозы.
9. Утилизация адонитола.
10. Утилизация лактозы.
11. Утилизация арабинозы.
12. Утилизация сорбитола.

Тип образца: чистый изолят из клинического или не относящегося к клиническому образца.

Принцип измерения

KB002 использует стандартизированную цветометрическую систему идентификации на основе 12 биохимических тестов. Метод основан на изменении pH и утилизации субстратов: в процессе инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды — самопроизвольно или после добавления реагента.

Состав набора

Каждый комплект содержит 5, 10 или 20 наборов KB002, рассчитанных соответственно на выполнение 5, 10 или 20 тестов. В состав набора входят стерильные среды для:

• утилизации цитрата;
• утилизации лизина;
• утилизации орнитина;
• обнаружения уреазы;
• теста на дезаминирование фенилаланина;
• восстановления нитрата;
• определения образования H₂S;
• тестов на утилизацию пяти углеводов: глюкозы, адонитола, лактозы, арабинозы и сорбитола.

Также в комплект входят:

• техническая инструкция по применению;
• индекс идентификации;
• 0,8%-ная сульфаниловая кислота (R015) для теста на нитраты;
• раствор α-нафтиламина (R009) для теста на нитраты;
• реагент TDA (R036) для определения дезаминирования фенилаланина;
• таблица интерпретации результатов;
• бланк регистрации результатов.

Для позиции HiMedia KB002-5KT предусмотрено 5 наборов KB002.

Материалы, необходимые, но не поставляемые

1. Стандарт Мак-Фарланда.
2. Инокуляционные петли и пипетки.
3. Обогатительная или изоляционная питательная среда.

Методика подготовки инокулята

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на распространённой питательной среде, например на питательном агаре (M001) или триптиказо-соевом агаре (M290).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм или соответствия стандарту Мак-Фарланда 0,5. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В таком случае инкубируйте до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
3. В качестве альтернативы отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,1 OD при 620 нм.

Методика инокуляции набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй, содержащей порцию инокулята.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.
Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Первичная интерпретация

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки 5 и 6 добавляйте в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Интерпретация биохимических реакций

1. Тест на утилизацию цитрата — лунка 1

• Положительная реакция: изменение цвета на синий.
• Отрицательная реакция: зелёный цвет или отсутствие изменения цвета.

2. Утилизация лизина — лунка 2

• Положительная реакция: изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или появление жёлтого цвета.

3. Утилизация орнитина — лунка 3

• Положительная реакция: изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или появление жёлтого цвета.

4. Тест на уреазу — лунка 4

• Положительная реакция: изменение цвета на розовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

5. Тест на дезаминирование фенилаланина — лунка 5

• Добавьте 2–3 капли реагента TDA (R036).
• Положительная реакция: появление тёмно-зелёного цвета в течение 1 мин.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

6. Тест на восстановление нитрата — лунка 6

• Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
• Положительная реакция: немедленное появление розово-красного цвета после добавления реагентов.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

7. Образование H₂S — лунка 7

• Положительная реакция: изменение цвета от оранжево-жёлтого до чёрного.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или появление слегка желтовато-коричневого цвета.

8. Тесты на ферментацию углеводов — лунки 8–12

• Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
• Отрицательная реакция: красный цвет или отсутствие изменения цвета.

Таблица интерпретации результатов

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная непрозрачная белая полоска с 12 лунками, содержащими среды для следующих реакций:

1. Утилизация цитрата.
2. Утилизация лизина.
3. Утилизация орнитина.
4. Обнаружение уреазы.
5. Дезаминирование фенилаланина (TDA).
6. Восстановление нитрата.
7. Образование H₂S.
8. Утилизация глюкозы.
9. Утилизация адонитола.
10. Утилизация лактозы.
11. Утилизация арабинозы.
12. Утилизация сорбитола.

Количество среды

Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Индекс идентификации грамотрицательных палочек

Обозначения в таблице: + — положительная реакция более чем у 90 % штаммов; — — отрицательная реакция более чем у 90 % штаммов; V — положительная реакция у 11–89 % штаммов; nd — данные отсутствуют.

| Организм | Утилизация цитрата | Лизин | Орнит