HiMedia KB002-20KT Ассортиментный биохимический тест-набор HiAssorted (20 наборов)

Ассортиментный биохимический тест-набор HiMedia KB002-20KT Ассортиментный биохимический тест-набор HiAssorted (20 наборов) производства HiMedia содержит 12 тестов для идентификации грамотрицательных палочек. Набор предназначен для работы с чистыми изолятами клинических и не клинических образцов и не применяется непосредственно для исследования исходных клинических проб.

Назначение

KB002 — стандартизированная колориметрическая система идентификации грамотрицательных палочек по 12 традиционным биохимическим тестам. Тестируемые микроорганизмы обычно являются оксидазоотрицательными, нитратположительными палочками, которые часто выделяют из клинических и не клинических образцов.

Тип образца: чистый изолят из клинического или не клинического образца.

Набор предназначен для профессионального применения in vitro. Для идентификации используют только чистые культуры, предварительно выделенные на подходящих изоляционных средах.

Состав и комплектность

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 комплектов KB002, достаточных для проведения соответственно 5, 10 или 20 тестов.

В состав каждого комплекта входят стерильные среды для следующих реакций:

• утилизация цитрата;
• утилизация лизина;
• утилизация орнитина;
• выявление уреазы;
• декарбоксилирование фенилаланина;
• восстановление нитрата;
• выявление образования H₂S;
• утилизация пяти углеводов: глюкозы, адонитола, лактозы, арабинозы и сорбитола.

Комплект поставки:

• стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками;
• техническая инструкция к продукту;
• индекс идентификации;
• сульфаниловая кислота 0,8 % (R015) для теста на нитрат;
• раствор α-нафтиламина (R009) для теста на нитрат;
• реагент TDA (R036) для декарбоксилирования фенилаланина;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые, но не входящие в комплект

1. Стандарт Мак-Фарланда.
2. Инокуляционные петли и пипетки.
3. Обогащающая или изоляционная питательная среда.

Принцип идентификации

KB002 использует колориметрический принцип определения изменения pH и утилизации субстратов. После инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды — непосредственно или после добавления реагента.

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (M001) или триптон-соевом агаре (M290).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет оптической плотности 0,1 при 620 нм или значения 0,5 по стандарту Мак-Фарланда. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируйте до достижения мутности инокулята 0,1 единицы оптической плотности при 620 нм.
3. Альтернативный способ подготовки инокулята: отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,1 единицы оптической плотности при 620 нм.

Внесение инокулята

1. Вскройте комплект с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
4. В качестве альтернативы каждую лунку можно инокулировать прокалыванием инокуляционной петлёй, содержащей порцию инокулята.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Первичную интерпретацию выполняют в соответствии с указаниями индекса идентификации. Реагенты в лунки 5 и 6 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Реакция в лунке 1: утилизация цитрата

• Положительная реакция: изменение цвета на синий.
• Отрицательная реакция: зелёный цвет или отсутствие изменения цвета.

Реакция в лунке 2: утилизация лизина

• Положительная реакция: изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или жёлтый цвет.

Реакция в лунке 3: утилизация орнитина

• Положительная реакция: изменение цвета на фиолетовый или тёмно-фиолетовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или жёлтый цвет.

Реакция в лунке 4: тест на уреазу

• Положительная реакция: изменение цвета на розовый.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

Реакция в лунке 5: декарбоксилирование фенилаланина

1. Добавьте 2–3 капли реагента TDA (R036).
2. Положительная реакция: появление тёмно-зелёного цвета в течение 1 мин.
3. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

Реакция в лунке 6: восстановление нитрата

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
2. Добавьте 1–2 капли реагента N,N-диметил-1-нафтиламина (R009).
3. Положительная реакция: немедленное появление розовато-красного цвета после добавления реагентов.
4. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета.

Реакция в лунке 7: образование H₂S

• Положительная реакция: изменение цвета от оранжево-жёлтого до чёрного.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или слабый желтовато-коричневый цвет.

Реакция в лунках 8–12: ферментация углеводов

• Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
• Отрицательная реакция: красный цвет или отсутствие изменения цвета.

Для некоторых микроорганизмов при тесте на ферментацию углеводов возможна слабая реакция. В таком случае реакцию регистрируют как ± и продолжают инкубацию до 48 ч. Оранжевый цвет после 48 ч инкубации интерпретируют как отрицательную реакцию.

Таблица интерпретации результатов

Технические характеристики

• Количество биохимических тестов: 12.
• Количество лунок в полоске: 12.
• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Объём инокулята на одну лунку: 50 мкл.
• Температура подготовки инокулята: 35–37 °C.
• Время подготовки инокулята в бульоне BHI: 4–6 ч; для некоторых микроорганизмов — более 6 ч, до достижения оптической плотности 0,1 при 620 нм.
• Температура инкубации теста: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации теста: 18–24 ч.
• Максимальная продолжительность инкубации при слабой реакции ферментации углеводов: до 48 ч.
• Требуемая мутность инокулята: 0,1 единицы оптической плотности при 620 нм или 0,5 по стандарту Мак-Фарланда.
• Форма поставки: стерильная белая непрозрачная полоска.
• Контроль стерильности: соответствует критериям выпуска.
• Назначение: питательная среда для биохимической идентификации микроорганизмов.
• Условия хранения при получении: 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Культуральные характеристики и контроль качества

Стерильная белая непрозрачная полоска содержит