HiMedia KB001-20KT Биохимический тест-набор HiIMViC (20 наборов)

Биохимический тест-набор HiMedia KB001-20KT Биохимический тест-набор HiIMViC (20 наборов) предназначен для стандартизированной цветометрической идентификации по 12 традиционным биохимическим тестам. Набор используется для идентификации и дифференциации видов семейства Enterobacteriaceae из чистой культуры и не предназначен для прямого анализа клинических образцов.

Назначение

KB001 — стандартизированная цветометрическая система идентификации, включающая 12 традиционных биохимических тестов для идентификации и дифференциации видов семейства Enterobacteriaceae с использованием чистого изолята.

Микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae являются грамотрицательными, оксидазоотрицательными, нитратположительными палочками. Представители этого семейства часто выделяются из клинических и не клинических образцов.

Принцип измерения

Система основана на изменении pH и утилизации субстратов. Во время инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды — спонтанно или после добавления соответствующего реагента.

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 наборов KB001, рассчитанных соответственно на выполнение 5, 10 или 20 тестов. Один тест включает комбинацию 12 реакций для дифференциации видов Enterobacteriaceae:

• стерильные среды для определения индола;
• стерильная среда для метилового красного;
• стерильная среда для реакции Фогеса—Проскауэра;
• стерильная среда для утилизации цитрата;
• среды с 8 углеводами:
  • глюкоза;
  • адонитол;
  • арабиноза;
  • лактоза;
  • сорбитол;
  • маннитол;
  • рамноза;
  • сахароза;
• техническая инструкция;
• идентификационный индекс;
• реактив Ковача (R008) для теста на индол;
• индикатор метилового красного (I007) для теста на метиловый красный;
• реактив Баритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра;
• реактив Баритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра;
• таблица интерпретации результатов;
• бланк регистрации результатов.

Необходимые, но не входящие в комплект материалы

• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли;
• пипетки;
• среда обогащения или среда для выделения культуры.

Тип образца

Чистый изолят, полученный из клинического или не клинического образца.

Подготовка и обращение с образцами

Сбор и обращение с образцами выполняют в соответствии с инструкцией по применению набора.

Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами. Микроорганизмы предварительно выделяют на подходящей среде для выделения; для анализа используют только чистые культуры.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре Nutrient Agar (M001) или триптиказо-соевом агаре Tryptone Soya Agar (M290).
2. Возьмите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона для инфузии мозга и сердца BHI Broth (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч, пока мутность инокулята не достигнет оптической плотности 0,1 OD при 620 нм или показателя 0,5 по стандарту Мак-Фарланда. Для некоторых микроорганизмов может потребоваться инкубация более 6 ч. В этом случае инкубируйте культуру до достижения мутности инокулята 0,1 OD при 620 нм.
3. Альтернативный способ подготовки инокулята: возьмите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,1 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностного посева.
3. Альтернативно набор можно инокулировать прокалыванием каждой отдельной лунки инокуляционной петлёй с набранным инокулятом.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют по стандартам, приведённым в идентификационном индексе. Реагенты в лунки № 1, 2 и 3 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для следующих тестов:

1. индол;
2. метиловый красный;
3. реакция Фогеса—Проскауэра;
4. утилизация цитрата;
5. глюкоза;
6. адонитол;
7. арабиноза;
8. лактоза;
9. сорбитол;
10. маннитол;
11. рамноза;
12. сахароза.

Количество среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

• Результат: соответствует критериям выпуска.

Интерпретация отдельных реакций

Результаты интерпретируют по стандартам, приведённым в идентификационном индексе. Реагенты в лунки № 1, 2 и 3 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

1. Тест на индол, лунка № 1

   • Добавьте 2–3 капли реактива Ковача (R008).
   • Положительная реакция: образование розовато-красного кольца.
   • Отсутствие красного кольца: отрицательная реакция.

2. Тест с метиловым красным, лунка № 2

   • Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007).
   • Положительная реакция: появление красной окраски.
   • Желтовато-оранжевая окраска: отрицательная реакция.

3. Тест Фогеса—Проскауэра, лунка № 3

   • Добавьте 2–3 капли реактива Баритта A (R029) и 1 каплю реактива Баритта B (R030).
   • Положительная реакция: появление розовато-красной окраски через 5–10 мин.
   • Отсутствие изменения окраски или медная окраска вследствие реакции реагентов A и B: отрицательная реакция.

4. Тест на утилизацию цитрата, лунка № 4

   • Положительная реакция: изменение окраски на синюю.
   • Зелёная окраска или отсутствие изменения окраски: отрицательная реакция.

5. Тест на утилизацию углеводов, лунки № 5–12

   • Положительная реакция: изменение окраски на жёлтую.
   • Красная окраска или отсутствие изменения окраски: отрицательная реакция.

Таблица интерпретации результатов

Идентификационный индекс видов Enterobacteriaceae