HiMedia KB001-10KT Биохимический тест-набор HiIMViC (10 наборов)

Биохимический тест-набор HiMedia KB001-10KT HiIMViC (10 наборов) для цветометрической идентификации по 12 традиционным биохимическим тестам. HiMedia KB001-10KT применяют для дифференциации видов семейства Enterobacteriaceae по чистой изолированной культуре; набор нельзя использовать непосредственно с клиническими образцами.

Назначение

KB001 — стандартизированная цветометрическая система идентификации, включающая 12 традиционных биохимических тестов для идентификации и дифференциации видов семейства Enterobacteriaceae по чистой изолированной культуре.

Организмы семейства Enterobacteriaceae являются грамотрицательными, оксидазоотрицательными, нитратположительными палочками и часто выделяются из клинических и внеклинических образцов.

Тип образца: чистая изолированная культура из клинического или внеклинического образца.

Принцип измерения

Идентификация основана на изменении pH и утилизации субстратов. В процессе инкубации микроорганизмы претерпевают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды. Изменение может быть видимым непосредственно или появляться после добавления реагента.

Состав набора

Каждый набор содержит 5, 10 или 20 комплектов KB001, рассчитанных соответственно на проведение 5, 10 или 20 тестов. Каждый комплект включает комбинацию из 12 тестов для дифференциации видов Enterobacteriaceae:

• стерильные среды для тестов на индол, метиловый красный, Фогеса—Проскауэра и утилизацию цитрата;
• 8 углеводов: глюкоза, адонитол, арабиноза, лактоза, сорбитол, маннитол, рамноза, сахароза;
• техническая инструкция;
• индекс идентификации;
• реактив Ковача (R008) для теста на индол;
• индикатор метилового красного (1007) для теста MR;
• реактив Баритта A (R029) для теста VP;
• реактив Баритта B (R030) для теста VP;
• таблица интерпретации результатов;
• лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые для работы

В комплект не входят:

• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли;
• пипетки;
• обогатительная среда или среда для выделения культуры.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Выделите исследуемый микроорганизм на стандартной среде, например на питательном агаре (M001) или триптиказо-соевом агаре (M290).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона BHI (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 4–6 ч до достижения мутности инокулята, соответствующей оптической плотности 0,1 при 620 нм или стандарту Мак-Фарланда 0,5. Для некоторых микроорганизмов требуется более 6 ч инкубации. В таком случае продолжайте инкубацию до достижения мутности, соответствующей оптической плотности 0,1 при 620 нм.
3. В качестве альтернативы приготовьте инокулят, отобрав 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовив однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать оптической плотности 0,1 при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Внесите в каждую лунку по 50 мкл подготовленного инокулята методом поверхностной инокуляции.
3. В качестве альтернативы набор можно инокулировать прокалыванием каждой отдельной лунки инокуляционной петлёй с одной петлёй инокулята.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 18–24 ч.

Интерпретация результатов

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 1, 2 и 3 следует добавлять в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими среды для следующих тестов:

1. индол;
2. метиловый красный;
3. Фогес—Проскауэр;
4. утилизация цитрата;
5. глюкоза;
6. адонитол;
7. арабиноза;
8. лактоза;
9. сорбитол;
10. маннитол;
11. рамноза;
12. сахароза.

Количество среды

Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Проведение отдельных тестов

Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями индекса идентификации. Реагенты в лунки № 1, 2 и 3 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

1. Тест на индол, лунка № 1

   • Добавьте 2–3 капли реактива Ковача (R008).
   • Положительная реакция: появление розовато-красного кольца.
   • Отсутствие красного кольца: отрицательная реакция.

2. Тест с метиловым красным, лунка № 2

   • Добавьте 2–3 капли индикатора метилового красного (I007).
   • Положительная реакция: появление красной окраски.
   • Желтовато-оранжевая окраска: отрицательная реакция.

3. Тест Фогеса—Проскауэра, лунка № 3

   • Добавьте 2–3 капли реактива Баритта A (R029) и 1 каплю реактива Баритта B (R030).
   • Положительная реакция: появление розовато-красной окраски через 5–10 мин.
   • Отсутствие изменения цвета или медная окраска вследствие реакции реактивов A и B: отрицательная реакция.

4. Тест на утилизацию цитрата, лунка № 4

   • Положительная реакция: изменение цвета на синий.
   • Зелёная окраска или отсутствие изменения цвета: отрицательная реакция.

5. Тест на утилизацию углеводов, лунки № 5–12

   • Положительная реакция: изменение цвета на жёлтый.
   • Красная окраска или отсутствие изменения цвета: отрицательная реакция.

Таблица интерпретации результатов

Индекс идентификации видов Enterobacteriaceae