Набор для обнаружения ниацина, модифицированный HiMedia K048-1KT

Диагностический дифференциальный набор для обнаружения ниацина, модифицированный HiMedia K048-1KT. Применяется для идентификации Mycobacterium tuberculosis и дифференциации видов микобактерий на основе способности продуцировать никотиновую кислоту.

Принцип измерения

Метод основан на способности Mycobacterium tuberculosis, а также некоторых изолятов Mycobacterium simiae и Mycobacterium chelonae синтезировать ниацин (производное никотиновой кислоты) в процессе роста. В отличие от большинства других микобактерий, данные штаммы не метаболизируют ниацин далее, вследствие чего он накапливается и экскретируется в агар или на скос среды. При взаимодействии накопленной никотиновой кислоты с цианистыми соединениями реагентов развивается ярко-жёлтое окрашивание.

Область применения

Набор предназначен для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулеза. Важные ограничения:

• Тест не должен использоваться как единственный метод идентификации M. tuberculosis, так как некоторые штаммы M. bovis (включая субштаммы BCG) и нетуберкулезные микобактерии (M. simiae, M. chelonae chemovar niacinogenes) также могут давать положительную реакцию.
• Для проведения анализа культура должна быть выращена на среде Левенштейна-Йенсена в течение не менее 3–4 недель и иметь массивный рост (не менее 50 колоний). Использование других типов сред может привести к ложноотрицательным результатам из-за недостаточного количества ниацина.

Состав набора

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Методика проведения анализа

Подготовка тестового образца

1. Используйте только культуру микобактерий старше 3 недель, выращенную на скосах среды Левенштейна-Йенсена с обильным ростом. Не используйте тест для смешанных культур.
2. Добавьте 2 мл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора на скос.
3. Разрежьте или проколите скос лопаткой или иглой.
4. Экстракция ниацина в воду может быть проведена одним из способов:
   • Инкубация скоса в вертикальном положении при 37 °C в течение 2 ч в водяной бане.
   • Горизонтальное положение флакона при комнатной температуре в течение 20 мин.
   • Горизонтальное положение флакона в автоклаве при 121 °C в течение 30 мин.
5. Выдержите скос в вертикальном положении 5 мин.
6. Используйте 1 мл полученного раствора в качестве тестового образца. Рекомендуется использовать шприцы объёмом 1 мл для переноса растворов.

Проведение теста

1. Перенесите содержимое Части А (1 мл) в Часть В (1 мл). Полученная смесь является рабочим раствором реагента.
2. С помощью шприца перенесите тестовый образец (1 мл) в раствор реагента (Часть А + Часть В).
3. Положительная реакция: появление жёлтого цвета в течение 5 минут.
4. Отрицательная реакция: раствор остаётся бесцветным в течение 5 минут.

Контрольные тесты

Положительный контроль:

1. Смешайте содержимое Части А (1 мл) и Части В (1 мл).
2. Перенесите 1 мл Реагента P (R055) в раствор реагента.
3. Результат: появление жёлтого цвета в течение 5 минут.

Отрицательный контроль:

1. Смешайте содержимое Части А (1 мл) и Части В (1 мл).
2. Перенесите 1 мл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора в раствор реагента.
3. Результат: раствор остаётся бесцветным через 5 минут.

Меры предосторожности и утилизация

• Светочувствительность: Реагенты чувствительны к свету, избегайте их воздействия.
• Токсичность: Реагенты в Частях А и В токсичны, при реакции выделяется ядовитый газ. Работайте в боксе биологической безопасности, используйте маску.
• Опасность: Часть А является канцерогеном. Избегайте вдыхания паров и контакта с кожей. Не допускайте контакта реагентов с кислотами.
• Утилизация: Перед утилизацией нейтрализуйте пробирки и флаконы с реагентами, добавив в каждую 10 % раствор NaOH. Затем проведите автоклавирование или сжигание.

Контроль качества

• Внешний вид: Набор содержит 10 флаконов Части А (по 1 мл), 10 флаконов Части В (по 1 мл) и 1 флакон Реагента P (R055, 4 мл).
• Цвет и прозрачность: Все реагенты (А, В, R055) представляют собой прозрачные бесцветные растворы без нерастворимых частиц.
• Стерильность: Соответствует критериям выпуска.

Технические характеристики

• Назначение: дифференциальная диагностика микобактерий
• Тип среды: диагностическая, дифференциальная
• Температура хранения: +2…+8 °C
• Срок годности: 6 месяцев с даты производства
• Регистрация: зарегистрировано в Росздравнадзоре