Набор для обнаружения ниацина, модифицированный HiMedia K048-1KT

Диагностический набор для обнаружения ниацина, модифицированный HiMedia K048-1KT, предназначен для проведения 8 ниациновых тестов с положительным и отрицательным контролями. Набор применяется для дифференциальной диагностики микобактерий туберкулёза, при этом исследуемая культура должна быть выращена на среде Левенштейна—Йенсена не менее 3–4 недель и иметь массивный рост — не менее 50 колоний.

Назначение

Набор HiMedia K048-1KT используют для обнаружения ниацина, продуцируемого микобактериями, и дополнительного подтверждения Mycobacterium tuberculosis. Изделие относится к диагностическим и дифференциальным средствам контроля микробиологических параметров.

Ниацин, являющийся производным никотиновой кислоты, участвует в окислительно-восстановительных реакциях в клетках кислотоустойчивых микобактерий. Ниацин продуцируют все микобактерии, однако у Mycobacterium tuberculosis вследствие блокирования ряда метаболических путей никотиновая кислота накапливается в значительно больших количествах, чем у микобактерий других видов.

Ниацинотрицательные штаммы встречаются редко. Ниациновую пробу нельзя использовать как единственный тест для идентификации Mycobacterium tuberculosis, поскольку отдельные штаммы Mycobacterium bovis, включая субштаммы BCG, а также некоторые нетуберкулёзные микобактерии, в том числе Mycobacterium simiae и Mycobacterium chelonae chemovar niacinogenes, способны синтезировать относительно большие количества ниацина и давать положительную реакцию. Для дифференциации выделенных микобактерий необходимо использовать комплекс рекомендованных биохимических реакций.

Принцип метода

Продуцируемая микобактериями никотиновая кислота вступает в реакцию с цианистыми соединениями с образованием ярко-жёлтого окрашивания. Ниацин, накапливающийся в процессе роста, выделяется в агар или скошенную часть питательной среды, после чего извлекается стерильной дистиллированной водой или физиологическим раствором и определяется с помощью реагентов набора.

Наибольшее количество никотиновой кислоты обнаруживается у штаммов, выращенных на среде Левенштейна—Йенсена, поэтому эта среда используется для проведения ниациновой пробы.

Подготовка исследуемой пробы

1. Используйте только культуру микобактерий возрастом более 3 недель, выращенную на скошенной среде Левенштейна—Йенсена и демонстрирующую массивный рост.
2. Культуры, выращенные на других типах питательных сред, могут не продуцировать достаточное количество ниацина для получения положительного результата этим методом.
3. Ложноотрицательные результаты возможны при использовании культур с недостаточным количеством микроорганизмов или культур, выращенных не на среде Левенштейна—Йенсена.
4. Не используйте тест для культур, смешанных с другими микобактериями.
5. Добавьте 2 мл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора на скошенную поверхность среды.
6. Разрежьте или проколите скошенную поверхность шпателем либо иглой.
7. Для экстракции ниацина выберите один из вариантов:
   • инкубируйте флакон в вертикальном положении при 37 °C в течение 2 ч на водяной бане;
   • выдерживайте флакон в горизонтальном положении в течение 20 мин при комнатной температуре;
   • поместите флакон горизонтально в автоклав и выдерживайте при 121 °C в течение 30 мин, чтобы обеспечить экстракцию ниацина в дистиллированную воду.
8. Оставьте скошенную среду в вертикальном положении на 5 мин.
9. Используйте 1 мл полученного раствора в качестве исследуемой пробы.

Для переноса растворов рекомендуется использовать шприцы вместимостью 1 мл.

Методика проведения теста

1. Перенесите содержимое части A — 1 мл реагента — в часть B — 1 мл реагента.
2. Перемешайте содержимое частей A и B; полученный раствор используйте как реагентный раствор для дальнейшего тестирования.
3. Перенесите 1 мл исследуемой пробы в реагентный раствор частей A и B с помощью шприца.
4. Положительная реакция: появление жёлтого окрашивания в течение 5 мин.
5. Отрицательная реакция: отсутствие жёлтого окрашивания в течение 5 мин; реагентный раствор остаётся бесцветным.

Положительный контроль

1. Перенесите содержимое части A — 1 мл реагента — в часть B — 1 мл реагента.
2. Перемешайте содержимое частей A и B; полученный раствор используйте как реагентный раствор.
3. Перенесите 1 мл реагента P R055 в реагентный раствор частей A и B с помощью шприца.
4. Наблюдайте за появлением жёлтого окрашивания в течение 5 мин.

Ожидаемый результат положительного контроля: появление жёлтого окрашивания в течение 5 мин.

Отрицательный контроль

1. Перенесите содержимое части A — 1 мл реагента — в часть B — 1 мл реагента.
2. Перемешайте содержимое частей A и B; полученный раствор используйте как реагентный раствор.
3. Перенесите 1 мл стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора в реагентный раствор частей A и B с помощью шприца.
4. Оцените окраску через 5 мин.

Ожидаемый результат отрицательного контроля: раствор остаётся бесцветным после 5 мин.

Состав и идентификация

Идентификатор продукта

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Код продукта

Контроль качества

Внешний вид и комплектация

Каждый набор содержит:

• часть A: реагент, 1 мл — 10 флаконов;
• часть B: реагент, 1 мл — 10 флаконов;
• R055: реагент P, 4 мл — 1 флакон.

Цвет и прозрачность

Части A, B и R055 представляют собой прозрачные бесцветные растворы, не содержащие нерастворимых частиц.

Биохимический тест

Перенесите 1 мл реагента P R055 в реагентный раствор частей A и B с помощью шприца и наблюдайте за появлением жёлтого окрашивания в течение 5 мин.

Биохимический результат

• Образование жёлтого окрашивания в течение 5 мин.
• Отсутствие изменения окраски в течение 5 мин.
• Образование жёлтого окрашивания в течение 5 мин — положительная реакция.

Тест на стерильность

Набор соответствует критериям выпуска по результатам теста на стерильность.

Меры предосторожности

1. Реагенты светочувствительны; не подвергайте их воздействию света.
2. Реагенты частей A и B токсичны и образуют ядовитый газ. Соблюдайте осторожность при работе. Рекомендуется закрывать нос и рот защитной маской.
3. Не допускайте контакта реагентов с кислотами.
4. Часть A канцерогенна. Обращайтесь с реагентом осторожно, не вдыхайте пары и не допускайте контакта с кожей.
5. Перед утилизацией нейтрализуйте пробирки, добавив в каждую 10%-ный раствор NaOH.
6. Все работы выполняйте в шкафу биологической безопасности.

Утилизация

Добавьте 10%-ный раствор NaOH в каждый флакон с реагентом. После нейтрализации утилизируйте реагенты автоклавированием или сжиганием.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: +2…+8 °C.
• Срок годности: 6 месяцев с даты производства.
• Условие применения: использовать до даты, указанной на этикетке.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Код продукта: K048
• Тип среды: диагностическая
• Тип среды: дифференциальная
• Назначение: обнаружение ниацина и дополнительное подтверждение Mycobacterium tuberculosis
• Количество анализов: 8 ниациновых тестов с контролями
• Объём исследуемой пробы: 1 мл
• Объём стерильной воды или физиологического раствора для экстракции: 2 мл
• Температура инкубации на водяной бане: 37 °C