Набор для каталазного теста микобактерий HiMedia K044-1KT

Диагностический набор для каталазного теста микобактерий HiMedia K044-1KT (производство: HiMedia) предназначен для дифференциальной диагностики микобактерий. Набор позволяет проводить полуколичественное определение активности каталазы и выявлять термостабильные изоферменты данного энзима.

Принцип измерения

Метод основан на способности фермента каталазы расщеплять перекись водорода с образованием пузырьков кислорода согласно химической реакции: 2H₂O₂ → 2H₂O + O₂

В отличие от стандартных тестов на каталазу для других видов бактерий, в данном наборе используется 30 % раствор перекиси водорода в сильном детергентном растворе (10 % Твин 80). Детергент способствует диспергированию гидрофобных плотных агрегатов микобактерий до индивидуальных бацилл, что обеспечивает максимальную детекцию фермента.

Область применения

Набор используется для идентификации микобактерий, в том числе непигментированных видов.

• Термолабильная каталаза характерна для M. tuberculosis, M. bovis, M. gastri и отдельных штаммов комплекса M. avium.
• Термостабильная каталаза выявляется после инактивации при 68 °C.
• Отрицательный результат (отсутствие активности) характерен для M. bovis и некоторых резистентных к изониазиду штаммов M. tuberculosis.

Применяется для анализа клинических образцов (мокроты).

Методика проведения анализа

Подготовка реагента

Непосредственно перед использованием смешайте равные объемы реагента R058 (Часть А и Часть В). Аккуратно встряхните.

I. Полуколичественный тест

1. Инокулируйте поверхность среды Левенштейна-Йенсена (в стеклянной пробирке SL122, 5 мл) 0,1 мл 7-дневной жидкой культуры исследуемого организма.
2. Инкубируйте при 37 °C в течение двух недель. Крышки пробирок должны быть слегка ослаблены для обеспечения адекватного газообмена.
3. Добавьте 1 мл свежеприготовленного каталазного реагента R058 и оставьте пробирку в вертикальном положении на 5 минут.
4. Измерьте высоту столба пузырьков (вспенивания) над поверхностью питательной среды и зафиксируйте результат.

II. Тест на термостабильную каталазу

1. Эмульгируйте несколько колоний исследуемого организма в 0,5 мл каталазного буфера R057. Плотно закройте пробирку.
2. Поместите пробирку в водяную баню при 68 °C на 20 минут.
3. Извлеките пробирку и дайте ей остыть до комнатной температуры.
4. Добавьте 0,5 мл свежеприготовленного каталазного реагента R058.
5. Наблюдайте за появлением пузырьков на поверхности жидкости.
6. Результат считается отрицательным, если пузырьки не появились в течение 20 минут.

Интерпретация результатов

Полуколичественный тест

• Сильноположительный: высота столба пузырьков более 50 мм.
• Слабоположительный: высота столба пузырьков от 5 до 50 мм.
• Отрицательный: пузырьки отсутствуют.

Тест на термостабильную каталазу

• Положительный: появление пузырьков.
• Отрицательный: пузырьки отсутствуют.

Сводная таблица биохимических результатов

Контроль качества

• Отрицательный контроль: пробирка со средой Левенштейна-Йенсена без инокуляции.
• Положительный контроль: пробирка с референс-штаммом M. tuberculosis H37Rv (для капельного метода) или M. terrae (для полуколичественного и термостабильного тестов), выращенным на среде Левенштейна-Йенсена.

Технические характеристики

• Тип среды: диагностическая, дифференциальная
• Сертификат: ФСЗ 2012/12473
• Условия хранения: +2…+8 °C, в сухом темном месте
• Срок годности: 12 месяцев с даты производства
• Регистрация: Росздравнадзор

Комплект поставки

1. Стеклянные пробирки со средой Левенштейна-Йенсена (5 мл) SL122 — 5 шт.
2. Каталазный буфер R057 (0,5 мл) для изучения термостабильной каталазы — 5 шт.
3. Каталазный реагент R058:
   • Часть А: H₂O₂ (30 %) — 5 мл.
   • Часть В: Твин 80 (10 % раствор) — 5 мл.

Ограничения и меры предосторожности

• Для анализа должны использоваться хорошо изолированные колонии.
• Только для диагностики in vitro.
• При работе с клиническими образцами и культурами соблюдайте стандартные меры микробиологической безопасности.
• Использованные материалы подлежат стерилизации в автоклаве перед утилизацией.
• Важно: не встряхивайте пробирку во время теста, так как присутствие детергента может создать ложное впечатление образования пузырьков.