Набор для каталазного теста микобактерий HiMedia K044-1KT

Набор для каталазного теста микобактерий HiMedia K044-1KT — диагностический дифференциальный набор для полуколичественного определения каталазы и термостабильной каталазы, рассчитанный на 5 тестов. Набор предназначен для изучения каталазной активности микобактерий, включая дифференциальную диагностику микобактерий туберкулёза с применением 30 % перекиси водорода в 10 % растворе Твин 80.

Назначение

Набор HiMedia K044-1KT применяют для изучения каталазной активности микобактерий, полуколичественной оценки каталазы и определения чувствительной к нагреванию, или термостабильной, каталазы.

Тип питательной среды: диагностическая, дифференциальная.
Назначение изделия: среда.
Тип образца: клинические образцы, мокрота.
Количество тестов: 5.

Набор зарегистрирован в Росздравнадзоре.

Идентификация товара

Параметр	Значение
Наименование	Набор для каталазного теста микобактерий
Артикул	K044

Принцип измерения

Большинство микобактерий продуцируют фермент каталазу, однако виды и штаммы различаются по количеству образуемого фермента и термостабильности его изоферментов. Каталаза представляет собой внутриклеточный растворимый фермент, расщепляющий перекись водорода на воду и свободный кислород:

2H₂O₂ → 2H₂O + O₂

Появление пузырьков кислорода в реакционной смеси указывает на наличие каталазной активности. Полуколичественную каталазу и устойчивость каталазы к нагреванию при 68 °C и pH 7,0 используют как признаки при идентификации микобактерий.

Термостабильную каталазу определяют после инактивации термолабильной каталазы при 68 °C в течение 20 мин. Термолабильная каталаза характерна для M. tuberculosis, M. bovis, M. gastri и отдельных штаммов комплекса M. avium.

Каталазный тест для микобактерий отличается от тестов для других бактерий применением 30 % раствора перекиси водорода в сильном детергентном растворе Твин 80 с концентрацией 10 %, а не обычного 3 % раствора перекиси водорода. Детергент диспергирует гидрофобные плотно агрегированные микобактерии, разделяя крупные скопления на отдельные бациллы и повышая вероятность обнаружения каталазы.

М. bovis и некоторые штаммы M. tuberculosis, устойчивые к изониазиду, каталазной активностью не обладают.

Состав набора

Компонент	Количество
Стеклянные пробирки SL122-HiCatalase™ с 5 мл среды Левенштейна—Йенсена	5 шт.
R057 — каталазный буфер 0,5 мл для определения термостабильной каталазы	5 шт.
R058 — каталазный реагент, часть A: H₂O₂, 30 %	5 мл
R058 — каталазный реагент, часть B: Твин 80, 10 %	5 мл

Подготовка реагента

Непосредственно перед использованием смешайте равные объёмы реагента R058, части A и части B. Осторожно встряхните смесь.

Методика проведения анализа

Полуколичественный тест

1. Инокулируйте поверхность среды в стеклянной пробирке SL122-HiCatalase™ с 5 мл среды Левенштейна—Йенсена 0,1 мл 7-дневной жидкой культуры исследуемого микроорганизма.
2. Инкубируйте пробирку при 37 °C в течение 2 недель.
3. Оставьте крышку пробирки слегка ослабленной для обеспечения достаточного воздухообмена.
4. Добавьте 1 мл свежеприготовленного каталазного реагента R058 и оставьте пробирку в вертикальном положении на 5 мин.
5. Измерьте высоту столбика пузырьков или пены над поверхностью питательной среды и зарегистрируйте результат.

Определение термостабильной каталазы

Определение термостабильной каталазы используют как признак при идентификации непигментированных микобактерий.

1. Эмульгируйте несколько колоний исследуемого микроорганизма в 0,5 мл предоставленного каталазного буфера R057. Завинтите пробирку.
2. Поместите пробирку в водяную баню при 68 °C на 20 мин.
3. Извлеките пробирку и охладите до комнатной температуры.
4. Добавьте 0,5 мл свежеприготовленного каталазного реагента R058.
5. Наблюдайте за появлением пузырьков на поверхности жидкости.
6. Не считайте результат отрицательным до истечения 20 мин.

Интерпретация результатов

В обоих тестах наличие каталазы определяют по образованию пузырьков. Не встряхивайте пробирку: детергент в реакционной смеси может создать ложное впечатление образования пузырьков.

Полуколичественный каталазный тест

• Столбик пузырьков 5–50 мм: слабоположительная реакция.
• Столбик пузырьков более 50 мм: сильноположительная реакция.
• Отсутствие пузырьков: отрицательная реакция.

Тест на термостабильную каталазу

• Образование пузырьков: положительная реакция.
• Отсутствие пузырьков: отрицательная реакция.

Биохимические результаты

Результат	Полуколичественный каталазный тест	Полуколичественный каталазный тест
Положительный	Наблюдается выделение газа, столбик пузырьков более 50 мм	На поверхности жидкости наблюдается выделение газа, образование пузырьков
Слабоположительный	Наблюдается выделение газа, столбик пузырьков 5–50 мм
Отрицательный	Выделение газа отсутствует, пузырьки отсутствуют	Выделение газа отсутствует, пузырьки отсутствуют

Контроль качества

Внешний вид и состав комплекта

Каждый набор содержит:

• стеклянные пробирки SL122-HiCatalase™ с 5 мл среды Левенштейна—Йенсена — 5 шт.;
• каталазный буфер R057 для определения термостабильной каталазы — 5 шт.;
• каталазный реагент R058: часть A — H₂O₂, 30 %, 5 мл; часть B — Твин 80, 10 %, 5 мл.

Контроль полуколичественного каталазного теста

Непосредственно перед использованием добавьте 1 мл свежеприготовленного реагента R058, состоящего из частей A и B, к исследуемой культуре, инокулированной в стеклянную пробирку SL122-HiCatalase™ с 5 мл среды Левенштейна—Йенсена и инкубированной при 37 °C в течение 2 недель.

Контроль теста на термостабильную каталазу

Эмульгируйте несколько колоний или участок роста на поверхности среды в пробирке SL122 в 0,5 мл реагента R057.

Поместите пробирку в водяную баню при 68 °C на 20 мин. Извлеките пробирку и охладите до комнатной температуры. Добавьте 0,5 мл свежеприготовленного реагента R058.

Контроль стерильности

Набор соответствует критериям выпуска.

Контрольные культуры и постановка контроля

Для отрицательного контроля используют пробирку со средой Левенштейна—Йенсена без инокуляции культурой микобактерий.

Для положительного контроля используют:

• пробирку с референс-штаммом M. tuberculosis H37Rv, выращенным на среде Левенштейна—Йенсена, для капельного метода;
• пробирку с M. terrae, выращенным на среде Левенштейна—Йенсена, для полуколичественного теста и определения термостабильной каталазы.

Требования к образцам и обращению

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

Используйте хорошо изолированные колонии.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией. Материалы, контактировавшие с клиническим образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.
• Руководствуйтесь требованиями безопасности, приведёнными в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для проведения теста необходимо использовать хорошо изолированные колонии.

Условия хранения и срок годности

Температура хранения: +2…+8 °C.
Условия хранения: сухое тёмное место.
Срок годности: 12 месяцев с даты производства; дата указана на этикетке.

После получения храните набор при температуре +2…+8 °C. Используйте набор до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики набора сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных компонентов набора путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: K044
• Тип питательной среды: диагностическая
• Тип питательной среды: дифференциальная