Набор красителей для окрашивания кислотоустойчивых микроорганизмов HiMedia K005-1KT (1 набор)

Набор красителей для окрашивания кислотоустойчивых микроорганизмов HiMedia K005-1KT (1 набор) включает карболовый фуксин, раствор для обесцвечивания и метиленовый синий по Леффлеру для окрашивания по методу Циля—Нильсена. Набор применяют для выявления кислотоустойчивых микобактерий, возбудителя туберкулёза и Nocardia; метод не позволяет дифференцировать микобактерии комплекса Mycobacterium tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий и кислотоустойчивых сапрофитов.

Назначение и область применения

• Назначение изделия: краситель.
• Методика: окрашивание по Цилю—Нильсену с применением карболового фуксина, обесцвечивающего раствора и контрастирующего метиленового синего.
• Исследуемые микроорганизмы: кислотоустойчивые микобактерии, включая возбудителей туберкулёза, другие микобактерии и Nocardia.
• Область применения: первичное микроскопическое обследование больных и динамическое наблюдение за состоянием микобактериальной популяции в процессе лечения.
• Вид микроскопии: световая микроскопия окрашенного мазка; для первичного обследования также может использоваться люминесцентная микроскопия с флюорохромными красителями.

Микроскопическое исследование остаётся одним из основных методов на первичных этапах обследования больных и при динамическом наблюдении за состоянием микобактериальной популяции в процессе лечения. Чувствительность метода можно повысить за счёт повторного обследования пациента.

Первичное микроскопическое обследование выполняют прямой бактериоскопией мазка нативной мокроты, окрашенного по методу Циля—Нильсена, либо с применением флюорохромных красителей. Исследование проводят трижды по определённой схеме согласно приложению № 10 к приказу № 109 Минздрава РФ от 21.03.2003.

Метод окраски по Цилю—Нильсену предназначен для выявления кислотоустойчивых микобактерий, но не позволяет дифференцировать:

• микобактерии комплекса Mycobacterium tuberculosis, являющиеся возбудителями туберкулёза;
• нетуберкулёзные, или атипичные, микобактерии, являющиеся возбудителями микобактериозов;
• кислотоустойчивые сапрофиты, не вызывающие заболевания человека.

Принцип окрашивания

Кислотоустойчивое окрашивание основано на химическом составе клеточной стенки бактерий. Из-за трудности окрашивания кислотоустойчивых микроорганизмов обычными красителями применяют основные красители в присутствии контролируемого количества кислоты.

Клеточная стенка микобактерий содержит липиды, миколовые кислоты и воски. При одновременном воздействии нагревания и сильного протравливающего действия карболовой кислоты карболовый фуксин лучше проникает в микробную клетку, особенно в структуры клеточной стенки. Обычные анилиновые красители не проникают через клеточную стенку микобактерий, поэтому такие микроорганизмы ими не окрашиваются.

Для улучшения проникновения красителя при окрашивании обычно применяют нагревание либо смачивающие вещества. После окрашивания кислотоустойчивые микроорганизмы не обесцвечиваются спиртом и сохраняют краситель. Некислотоустойчивые микроорганизмы обесцвечиваются раствором для кислотоустойчивого окрашивания и воспринимают контрастирующий краситель.

В результате окрашивания:

• кислотоустойчивые микроорганизмы приобретают ярко-красный или малиново-красный цвет;
• остальные микроорганизмы и клеточный материал окрашиваются в синий цвет.

Методика проведения анализа

Окрашивание по Цилю—Нильсену

1. Приготовьте мазок нативной мокроты.
2. Нанесите на мазок карболовый фуксин.
3. Выполните окрашивание с подогреванием. Нагревание в сочетании с карболовой кислотой повышает проникновение красителя в клеточную стенку кислотоустойчивых микроорганизмов.
4. Обесцветьте мазок раствором для обесцвечивания в течение 3 мин. Последующая обработка мазка 25% раствором серной кислоты или 3% раствором солянокислого спирта удаляет краситель из структур, не обладающих достаточной гидрофобностью и устойчивостью к действию кислоты.
5. После обесцвечивания кислотоустойчивые и спиртоустойчивые микроорганизмы сохраняют краситель и остаются окрашенными в малиново-красный цвет.
6. Выполните контрастирующее окрашивание метиленовым синим по Леффлеру в течение 1 мин. Обесцвеченные элементы мазка окрашиваются для повышения контрастности препарата.
7. Исследуйте препарат методом световой микроскопии. Кислотоустойчивые микроорганизмы выявляются как ярко-красные элементы на синем фоне остальных микроорганизмов и клеточного материала.

Состав набора

1. Карболовый фуксин

• Основной фуксин: 0,3 г
• Спирт этиловый, 95 %: 10,0 мл
• Фенол: 5,0 мл
• Вода дистиллированная: 95,0 мл

2. Раствор для обесцвечивания

• Кислота соляная, концентрированная: 3,0 мл
• Спирт этиловый, 95 %: 97,0 мл

Раствор для обесцвечивания соответствует 3% раствору солянокислого спирта, применяемому на этапе обесцвечивания мазка.

3. Метиленовый синий по Леффлеру

• Метиленовый синий: 0,3 г
• Спирт этиловый, 95 %: 30,0 мл
• Вода дистиллированная: 100,0 мл

Комплектация

• Карболовый фуксин S005.
• Раствор для обесцвечивания S033.
• Метиленовый синий по Леффлеру S022.
• Количество: 1 набор.

Совместимые красители

Компоненты набора доступны отдельно:

• Карболовый фуксин S005 — концентрированный раствор.
• Карболовый фуксин S006 — готовый раствор.
• Метиленовый синий по Леффлеру S022.
• Раствор для обесцвечивания S033.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: ниже +30 °C.
• Упаковка: плотно закрытая.
• Защита при хранении: защищённое от света место.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.

Регистрационные данные

• Производитель: HiMedia.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03635.
• Регистрация: зарегистрировано в Росздравнадзоре РФ.