HiPer® PCR Mediated Site Directed Mutagenesis учебный набор HiMedia HTBM029-20PR (20 преп.)

Учебный набор HiPer® PCR Mediated Site Directed Mutagenesis HiMedia HTBM029-20PR (20 преп.) производства HiMedia предназначен для направленного мутагенеза с использованием высокоточной ДНК-полимеразы. Набор применяют для создания заданных нуклеотидных замен и анализа функций белков методом белковой инженерии.

Назначение

Набор предназначен для обучения направленному мутагенезу и выполнения замен нуклеотидов в заданных позициях ДНК.

Принцип метода

Направленный мутагенез проводят с помощью высокоточной ДНК-полимеразы Pfu Ultra для репликации обеих цепей плазмидной ДНК под действием мутагенных праймеров. В качестве матрицы используют сверхспирализованный двухцепочечный вектор ДНК с целевой вставкой и два синтетических олигонуклеотидных праймера, содержащих требуемую мутацию. Каждый праймер комплементарен одной из противоположных цепей вектора.

При температурном циклировании праймеры удлиняются ДНК-полимеразой Hi-Proof без вытеснения праймера. В результате образуется мутированная плазмида с одноцепочечными разрывами со смещёнными концами.

После температурного циклирования продукт обрабатывают эндонуклеазой рестрикции Dpn I. Фермент распознаёт метилированную и гемиметилированную ДНК по последовательности 5′-Gm⁶ATC-3′, расщепляет исходную матричную ДНК и позволяет отобрать синтезированную ДНК, содержащую мутацию. ДНК, выделенная из большинства штаммов E. coli, метилирована по dam и поэтому чувствительна к расщеплению Dpn I. Затем векторную ДНК с разрывами и заданной мутацией трансформируют в компетентные клетки XL1-Blue.

Технические характеристики

• Формат: учебный набор
• Количество постановок: 20 преп.
• Назначение: направленный мутагенез, специфическая замена нуклеотидов, анализ функций белков методом белковой инженерии