HiMedia HD029-5TB HiDip PCA с TTC и нейтрализаторами - Rose Bengal (5 планшетов)

Двусторонняя питательная среда HiMedia HD029-5TB HiDip PCA с TTC и нейтрализаторами - Rose Bengal (5 планшетов) предназначена для раздельного контроля бактерий и грибов на двух поверхностях планшета. Среда применяется для количественного определения микроорганизмов в образцах поверхностей и жидкостей; каждая поверхность содержит по 2,5 мл среды и оснащена нейтрализаторами широкого спектра антисептиков и дезинфицирующих средств.

Назначение и состав

HiMedia HD029-5TB содержит на отдельных поверхностях планшета стерильную среду PCA с TTC и нейтрализаторами и среду с розовым бенгалом, хлорамфениколом и нейтрализаторами. Планшет предназначен для контроля бактериальной обсеменённости, подсчёта дрожжей и плесневых грибов, а также исследования поверхностей и жидких образцов.

Состав среды PCA с TTC и нейтрализаторами

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Методика применения

Исследование поверхностей

1. Ослабьте крышку и извлеките планшет HiDip из контейнера.
2. В асептических условиях снимите с планшета защитную пластиковую крышку, не касаясь поверхностей агара.
3. Проверьте планшет на наличие обезвоживания или загрязнения.
4. Осторожно опустите планшет и прижмите агар к исследуемой поверхности, согнув основу по линии шарнира.
5. Прижимайте планшет равномерно и с достаточным усилием в течение нескольких секунд.
6. Не допускайте размазывания агара по исследуемой поверхности.
7. Повторите процедуру со второй агаровой поверхностью на участке, расположенном рядом с первоначальным местом отбора пробы.
8. Верните планшет в контейнер и плотно закройте крышку.
9. Инкубируйте контейнер в вертикальном положении при указанной температуре.

Исследование жидкостей

1. Ослабьте крышку и извлеките планшет HiDip из контейнера.
2. В асептических условиях снимите с планшета защитную пластиковую крышку, не касаясь поверхностей агара.
3. Проверьте планшет на наличие обезвоживания или загрязнения.
4. Погрузите планшет в исследуемую жидкость так, чтобы поверхность агара была полностью покрыта.
5. При недостаточном объёме жидкого образца налейте образец непосредственно на поверхность планшета.
6. Дайте избыточной жидкости стечь.
7. Верните планшет в контейнер и плотно закройте крышку.
8. Инкубируйте контейнер в вертикальном положении при указанной температуре.
9. Для последующей идентификации промаркируйте контейнер, указав номер образца, источник, дату, время и другие необходимые сведения.

Утилизация

Использованные планшеты HiDip следует обрабатывать с осторожностью, поскольку они содержат живые микроорганизмы.

Утилизация выполняется одним из следующих способов:

• погружением в подходящий дезинфицирующий раствор, например раствор на основе Dettol или фенольного дезинфицирующего средства, на ночь;
• автоклавированием после ослабления крышки.

Автоклав не является обязательным: для обеззараживания допускается использовать бытовую скороварку.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда PCA с TTC и нейтрализаторами

Агар для подсчёта общего числа микроорганизмов (PCA) разработан на основе состава, описанного Buchbinder et al.; применение среды рекомендовано APHA и FDA.

Ферментативный гидролизат казеина обеспечивает аминокислотами и другими сложными азотистыми веществами. Дрожжевой экстракт служит источником витаминов группы B.

Для среды PCA рекомендуется метод заливных чашек:

1. Образец разводят.
2. Подходящие разведения вносят в чашки Петри.
3. В чашки добавляют стерильный расплавленный агар.
4. Чашки осторожно вращают для равномерного перемешивания образца с агаром.

Метод подсчёта в заливных чашках предпочтительнее метода поверхностного посева, поскольку обеспечивает более высокие результаты. Среда PCA также подходит для определения бактериальной обсеменённости стерильных помещений.

Среда с розовым бенгалом, хлорамфениколом и нейтрализаторами

Среда с розовым бенгалом и хлорамфениколом первоначально разработана Jarvis и позднее модифицирована Overcast и Weakley. Применение розового бенгала в средах с нейтральным значением pH описано Smith и Dawson.

Микологический пептон, или папаиновый перевар соевого шрота, обеспечивает микроорганизмы необходимыми питательными веществами. Декстроза является ферментируемым углеводом. Хлорамфеникол подавляет грамотрицательные бактерии.

Краситель розовый бенгал подавляет развитие бактерий и уменьшает распространение плесневых грибов, контролирует размер и высоту колоний, включая колонии грибов рода Rhizopus. Нейтральное значение pH в сочетании с антибиотиком рассматривается как характеристика среды, способствующая селективному росту. Розовый бенгал поглощается колониями плесневых грибов и дрожжей, что облегчает их подсчёт.

Количество дрожжей или плесневых грибов в 1 г или 1 мл исследуемого образца рассчитывают умножением числа колоний на коэффициент разведения.

Бактерии и дрожжи могут иметь сходный внешний вид колоний, поэтому для их различения следует проводить микроскопическое исследование.

Нейтрализация антисептиков и дезинфицирующих средств

Нейтрализующие компоненты, входящие в состав сред, нейтрализуют широкий спектр антисептиков и дезинфицирующих средств, включая:

• четвертичные аммониевые соединения;
• фенольные соединения;
• препараты йода;
• хлорсодержащие препараты;
• соединения ртути;
• формальдегид;
• глутаровый альдегид.

Назначение отдельных нейтрализаторов:

• бисульфит натрия нейтрализует альдегиды;
• тиогликолят натрия нейтрализует соединения ртути;
• тиосульфат натрия нейтрализует йод и хлор;
• лецитин нейтрализует четвертичные аммониевые соединения;
• полисорбат 80, неионогенное поверхностно-активное вещество, нейтрализует замещённые фенольные соединения.

Для испытаний используются следующие дезинфицирующие средства и концентрации:

• хлор — 2 %;
• формальдегид — 2 %;
• глутаровый альдегид — 1 %;
• йод — 2 %;
• фенол — 2 %;
• четвертичные аммониевые соединения — 1/750;
• соединения ртути — 1/1000.

Ограничения и мешающие факторы

Из-за селективных свойств среды и типа исследуемого образца отдельные штаммы грибов могут расти на полной среде слабо или не расти вовсе. Некоторые штаммы бактерий могут не подавляться либо подавляться только частично.

Среду необходимо защищать от воздействия света: фотодеградация розового бенгала приводит к образованию соединений, токсичных для грибов.

Контроль качества

Внешний вид

Планшет HiDip содержит комбинацию стерильной среды PCA с TTC и нейтрализаторами и среды с розовым бенгалом с нейтрализаторами, нанесённых на отдельные поверхности.

Цвет

• Среда PCA с TTC и нейтрализаторами: светло-жёлтая.
• Среда с розовым бенгалом и нейтрализаторами: насыщенно-розовая.

Контрольные параметры

• Количество среды: 2,5 мл на поверхность.
• pH среды PCA с TTC и нейтрализаторами: 6,80–7,20.
• pH среды с розовым бенгалом и нейтрализаторами: 7,00–7,40.
• Испытание на стерильность: соответствует критериям выпуска.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации на среде PCA с TTC и нейтрализаторами при 35–37 °C в течение 18–24 ч, а на среде с розовым бенгалом и нейтрализаторами — при 20–25 °C в течение 48–72 ч.