HiMedia GM395-500G OF базальная среда

Гранулированная базальная среда HiMedia GM395-500G OF производства HiMedia предназначена для дифференциации грамотрицательных бактерий по окислительному и ферментативному метаболизму углеводов; масса упаковки — 500 г. Среда применяется для исследования изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов с использованием аэробных и анаэробных условий инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

Назначение

Среда OF Basal Medium рекомендована для дифференциации грамотрицательных бактерий из клинических и неклинических образцов на основании ферментативного и окислительного метаболизма углеводов.

Тип образца: изолированный микроорганизм из клинических и неклинических образцов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип измерения и интерпретация

Среда OF разработана Hugh и Leifson для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Этот критерий используют при таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae.

Триптон обеспечивает бактерии необходимыми источниками углерода и азота, витаминами и другими веществами, требуемыми для роста.

Исследуемый углевод добавляют отдельно. Фосфат выполняет буферную функцию, а низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и распространение кислоты, образующейся на поверхности среды. Бромтимоловый синий служит индикатором pH.

Низкая концентрация агара позволяет определять подвижность микроорганизмов и способствует равномерному распределению кислоты, образующейся на поверхности среды:

• подвижность наблюдается в виде диффузной зоны, расходящейся от линии посева;
• неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза является наиболее важным углеводом для использования с базальной средой OF. Однако отдельные микроорганизмы могут метаболизировать другие углеводы, даже если не способны утилизировать декстрозу.

Разложение углевода до кислоты определяется с помощью индикатора pH — бромтимолового синего, который изменяет цвет на жёлтый. Окислительная утилизация происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативная утилизация — в условиях ограничения доступа воздуха.

По данным Hugh и Leifson, при посеве грамотрицательного микроорганизма в две пробирки с одинаковым углеводом — одна пробирка покрыта минеральным маслом для исключения кислорода, вторая оставлена открытой — можно наблюдать реакции, имеющие дифференциальное значение:

• ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в закрытой, так и в открытой пробирке;
• окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой пробирке, а в закрытой дают слабый рост без изменения среды;
• микроорганизмы, которые не относятся ни к окислительным, ни к ферментативным, не изменяют среду в закрытой пробирке и вызывают щелочную реакцию в открытой пробирке.

Кислую реакцию окислительных микроорганизмов лучше всего наблюдать на поверхности среды; постепенно реакция распространяется по всему объёму. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться в течение нескольких дней и впоследствии переходить в кислую реакцию.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Приготовьте среду с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы.
2. Приготовьте суспензию 9,38 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
4. Разлейте среду порциями по 100 мл.
5. Стерилизуйте среду автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении 15 фунтов на кв. дюйм (ориентировочно 0,103 МПа).
6. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
7. Во вторые 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
8. В третьи 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
9. Перемешайте подготовленные среды.
10. Асептически разлейте среды порциями по 5 мл в стерильные пробирки, используя по две пробирки для изучения аэробной и анаэробной ферментации.
11. Для каждого исследуемого микроорганизма используйте по две пробирки с каждым углеводом; выполните посев уколом.
12. Одну засеянную пробирку для каждого углеводсодержащего варианта покройте 2 мл стерильного минерального масла.
13. Вторую пробирку оставьте открытой.
14. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше.
15. Оцените результаты через 48 ч.

Базальную среду OF можно дополнить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта для повышения её питательности и улучшения роста бактерий.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

Обозначения:

• * — соответств