HiMedia GM1496I-500G Тетратионатная среда Мюллера-Кауффмана с новобиоцином

Питательная микробиологическая среда HiMedia GM1496I-500G «Тетратионатная среда Мюллера–Кауффмана с новобиоцином» — гранулированная среда для обогащения и выделения Salmonella из пищевых и других образцов. Среда применяется в санитарно-бактериологических и микробиологических лабораториях; хранение осуществляется при 10–30 °C в плотно закрытой упаковке.

Назначение

Среда рекомендована для повышения эффективности обогащения и выделения Salmonella из пищевых продуктов, кормов для животных, фекалий животных и образцов окружающей среды на стадии первичного производства.

Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017 и ISO 11133:2014 (E) / Amd. : 2020.

Состав среды по спецификации ISO

Формула тетратионатного бульона Мюллера–Кауффмана с новобиоцином (MKTTn):

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Добавки после автоклавирования по спецификации ISO

Состав гранулированной основы GM14961

Гранулированная основа тетратионатного бульона Мюллера–Кауффмана с новобиоцином:

Экстракт HM эквивалентен мясному экстракту. Желчь эквивалентна бычьей желчи. Триптон эквивалентен ферментативному гидролизату казеина.

Добавка MKTT FD203 для GM14961

Раствор йода и йодида необходимо добавлять, но он не входит в комплект поставки; раствор готовят непосредственно перед использованием.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 89,42 г обезвоженной среды, что соответствует количеству среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте среду только до кипения.
3. Не автоклавируйте.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Непосредственно перед использованием в асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона добавки MKTT с новобиоцином FD203 и 20 мл раствора йода и йодида.
6. Для приготовления 100 мл раствора йода и йодида используют 20 г йода и 25 г йодида калия в стерильной дистиллированной воде.
7. Тщательно перемешайте среду для равномерного распределения карбоната кальция.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки.

Из-за присутствия карбоната кальция приготовленная среда представляет собой опалесцирующий раствор с белым осадком.

Принцип действия и интерпретация

Исследование пищевых продуктов на наличие Salmonella требует методов, отличающихся от применяемых в клинических лабораториях. Это связано с обычно низким содержанием Salmonella в пищевых продуктах и часто неудовлетворительным физиологическим состоянием патогенов после воздействия стрессовых факторов при переработке или хранении продуктов.

Повреждённые клетки Salmonella восстанавливаются в неселективном жидком питательном бульоне, что облегчает обнаружение сублетально повреждённых микроорганизмов. Идеальная среда для предварительного обогащения должна обеспечивать восстановление клеточных повреждений, разбавление токсичных или ингибирующих веществ и достаточную питательность для роста Salmonella.

Мюллер рекомендовал тетратионатный бульон как селективную среду для выделения Salmonella. Кауффман модифицировал состав, добавив бычью желчь и бриллиантовый зелёный в качестве селективных агентов для подавления, в частности, бактерий рода Proteus. Британская стандартная спецификация предусматривает бриллиантовый зелёный тетратионатный бульон для выделения Salmonella из мяса, мясных продуктов, птицы и продуктов из птицы. Комитет ISO также рекомендовал эту среду предварительного обогащения для выявления видов Salmonella в пищевых продуктах и других материалах.

Селективность обеспечивается тетратионатом, образующимся в результате реакции тиосульфата с йодом. Использование более чем одного селективного бульона повышает вероятность выделения Salmonella из образцов, содержащих несколько серотипов.

Триптон и экстракт HM служат источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ. Желчь и добавленный бриллиантовый зелёный являются селективными агентами, подавляющими грамположительные и другие грамотрицательные микроорганизмы. Карбонат кальция выполняет функцию буфера. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Тиосульфат натрия является источником серы. Анионы тетратионата (S₄O₆) являются основным селективным агентом в этих средах обогащения.

В среде могут расти микроорганизмы, отличные от Salmonella, включая Morganella morganii и некоторые представители семейства Enterobacteriaceae. Поэтому все предположительно выявленные колонии Salmonella необходимо подтверждать дополнительными тестами.

Типы образцов

• Пищевые продукты, включая молоко и молочные продукты.
• Корма для животных.
• Фекалии животных.
• Образцы окружающей среды на стадии первичного производства.

Сбор и обработка образцов

Обработка

Обработку проводят в соответствии с ISO 6579-1:2017.

Предварительное обогащение

Образцы массой 25 г предварительно обогащают в 225 мл буферной пептонной воды M14941 и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. 0,1 мл предварительно обогащённого образца вносят в 10 мл бульона RVS M1448I или на агар MSRV M1428I.
2. Инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. 1 мл полученной культуры вносят в бульон MKTTn M14961.
4. Инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение

Полученную культуру высевают на модифицированный агар XLD M0311 и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно выполняют посев на вторую селективную агаризованную среду для выделения.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид сухой среды: гранулированная среда кремового или зеленовато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Приготовленная среда: светло-зелёный опалесцирующий раствор с обильным белым осадком.

Реакция и pH

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 8,93 % м/о при 25 °C.

Диапазон pH: 7,80–8,20.

Значение pH: 8,0 ± 0,2.

Культуральная характеристика

Культуральную реакцию оценивают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с добавлением 20 мл стерильного раствора йода и добавки MKTT FD203. Затем выполняют дополнительный пересев на модифицированный агар XLD M0311 и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Селективность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с добавлением 20 мл стерильного раствора йода и добавки MKTT FD203. Затем выполняют дополнительный пересев на триптон-соевый агар M290 и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.