Селективная питательная среда HiMedia GM1496I-500G Тетратионатная среда Мюллера-Кауффмана с новобиоцином для обогащения и изоляции Salmonellae. Применяется для анализа пищевых продуктов, кормов и экологических проб; состав и рабочие характеристики соответствуют стандартам ISO 6579-1:2017 и ISO 11133:2014.
Принцип измерения
Среда предназначена для выделения Salmonella из образцов, где патогены могут находиться в малом количестве или в поврежденном физиологическом состоянии после воздействия стрессовых факторов при переработке или хранении продуктов.
Селективность среды обеспечивается тетратионатом (образуется в результате реакции тиосульфата и йода), желчью и бриллиантовым зеленым, которые подавляют рост грамположительных и некоторых грамотрицательных микроорганизмов, включая виды Proteus. Триптон и мясной экстракт служат источниками углерода, азота, витаминов и минералов. Карбонат кальция выполняет роль буфера, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Тиосульфат натрия является источником серы. Анионы тетратионата (S₄O₆²⁻) выступают основным селективным агентом.
Область применения
Среда используется для анализа следующих типов образцов:
- пищевые продукты, включая молоко и молочные продукты;
- корма для животных;
- фекалии животных;
- экологические пробы, отобранные на этапе первичного производства.
Методика проведения анализа
Пробоподготовка и предварительное обогащение
Образцы (25 г в 225 мл) подвергаются предварительному обогащению в буферном пептонном бульоне (M14941) при температуре 34–38 °C в течение 18 ± 2 ч.
Селективное обогащение
- 0,1 мл предварительно обогащенного образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M1448I) или на агар MSRV (M1428I) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
- 1 мл полученной культуры инокулируют в бульон MKTTn (GM1496I) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
Изоляция и подтверждение
Культуру высевают на модифицированный агар XLD (M0311) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно проводится посев на второй изоляционный агар. Подтверждение осуществляется биохимическими и серологическими тестами.
Приготовление среды
- Суспендировать 89,42 г гранулированной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
- Нагреть среду до кипения. Автоклавирование запрещено.
- Охладить до 45–50 °C.
- Перед использованием асептически добавить содержимое 1 флакона добавки MKTT Novobiocin Supplement (FD203) и 20 мл раствора йода с йодидом (20 г йода и 25 г йодида калия на 100 мл стерильной дистиллированной воды).
- Тщательно перемешать для равномерного распределения карбоната кальция перед разливом в стерильные пробирки.
Примечание: Из-за содержания карбоната кальция приготовленная среда представляет собой опалесцирующий раствор с белым осадком.
Технические характеристики
Состав (согласно спецификации ISO для бульона MKTTn)
| Компонент | г/л |
|---|
| Мясной экстракт | 4,300 |
| Ферментативный гидролизат казеина | 8,600 |
| Желчь говяжья (для бактериологических целей) | 4,780 |
| Хлорид натрия (NaCl) | 2,600 |
| Карбонат кальция (CaCO₃) | 38,700 |
| Тиосульфат натрия, пентагидрат (Na₂S₂O₃ · 5H₂O) | 47,800 |
| Бриллиантовый зеленый | 0,0096 |
| Конечный pH (при 25 °C) | 8,0 ± 0,2 |
Добавки (вносятся после автоклавирования для спецификации ISO)
| Компонент | Значение |
|---|
| Новобиоцин, натриевая соль | 0,040 г |
| Раствор йода с йодидом | 20,00 мл |
| Йод | 4,000 г |
| Йодид калия (KI) | 5,000 г |
Состав гранулированной основы (GM1496I)
| Компонент | г/л |
|---|
| HM экстракт (эквивалент мясного экстракта) | 4,300 |
| Триптон (эквивалент ферментативного гидролизата казеина) | 8,600 |
| Желчь (эквивалент говяжьей желчи) | 4,780 |
| Хлорид натрия | 2,600 |
| Карбонат кальция | 38,700 |
| Тиосульфат натрия, пентагидрат | 47,800 |
| Бриллиантовый зеленый | 0,0096 |
| Конечный pH (при 25 °C) | 8,0 ± 0,2 |
Добавка MKTT Supplement (FD203) для GM1496I
| Компонент | Значение |
|---|
| Новобиоцин | 0,040 г |
| Раствор йода с йодидом (готовится отдельно) | 20,000 мл |
| Йод | 4,000 г |
| Йодид калия (KI) | 5,000 г |
Общие параметры
| Параметр | Значение |
|---|
| Происхождение компонентов | Животное |
| Тип продукта | Гранулированный |
| Физическая форма | Гранулы |
| Тип упаковки | ПНД (HDPE) |
| Внешний вид порошка | Гранулы от кремового до зеленовато-желтого цвета |
| Цвет и прозрачность готовой среды | Светло-зеленый опалесцирующий раствор с обильным белым осадком |
| pH (8,93% в/в раствор при 25 °C) | 7,80–8,20 |
Контроль качества и селективность
Продуктивность и селективность оцениваются после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с добавлением 20 мл раствора йода и добавки MKTT Supplement (FD203).
Продуктивность (восстановление на модифицированном агаре XLD M0311)
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Восстановление на агаре XLD (M0311) | Цвет колоний на агаре XLD (M0311) |
|---|
| Salmonella Enteritidis ATCC 13076 | 50–100 | >10 колоний | красные колонии с черным центром |
| +Escherichia coli ATCC 8739 | ≥10⁴ | — | — |
| +Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | ≥10⁴ | — | — |
| Salmonella Typhimurium ATCC 14028 | 50–100 | >10 колоний | красные колонии с черным центром |
| +Escherichia coli ATCC 25922 | ≥10⁴ | — | — |
| +Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | ≥10⁴ | — | — |
Селективность (рост и восстановление на агаре Tryptone Soya Agar M290)
| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | Восстановление на агаре TSA |
|---|
| Escherichia coli ATCC 8739 | ≥10⁴ | частичное ингибирование | ≤100 колоний |
| Escherichia coli ATCC 25922 | ≥10⁴ | частичное ингибирование | ≤100 колоний |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | ≥10⁴ | ингибирование — частичное ингибирование | <10 колоний |
| Enterococcus faecalis ATCC 19433 | ≥10⁴ | ингибирование — частичное ингибирование | <10 колоний |
Ограничения и меры предосторожности
- Полностью приготовленная среда нестабильна и должна быть использована немедленно. После инкубации допускается хранение среды селективного обогащения при 5 °C не более 72 ч.
- Различные организмы могут демонстрировать разные паттерны роста в зависимости от своих потребностей.
- Все предполагаемые колонии Salmonella должны пройти подтверждающие тесты.
- При работе с образцами и культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
Условия эксплуатации и хранения
- Температура хранения: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
- Среда гигроскопична; после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения образования комков.
- Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
- Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат автоклавированию и/или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.
HiMedia · GRM046-25GHiMedia GRM046-25G L-Цистеина гидрохлорид моногидрат691 руб.
HiMedia · GRM077-500GHiMedia GRM077-500G D-(+)-глюкоза безводная, 99.5% (уп/500 гр)916 руб.
HiMedia · K016-1KTHiMedia K016-1KT Тестовый набор Rapid Hicoliform TM (1 набор)1 326 руб.
HACH · 2162315Среда Lauryl tryptoseпо запросу
HACH · 2323250Среда Presence-absence testпо запросу
HACH · 2494925Среда Presence-absence testпо запросу
