HiMedia GM1252-500G Среда SOB (бульон Ханахана)

Гранулированная питательная среда HiMedia GM1252-500G Среда SOB (бульон Ханахана) с массой упаковки 500 г. Применяется для культивирования рекомбинантных Escherichia coli после трансформации и получения компетентных клеток; приготовленная среда хранится при 2–8 °C.

Назначение и область применения

Среда Ханахана предназначена для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli, прошедших трансформацию, а также для приготовления и трансформации компетентных клеток.

Для получения компетентных клеток бактерии выращивают в бульоне Ханахана до требуемой мутности, после чего применяют стандартные процедуры электропорации или обработки CaCl₂ в охлаждённых условиях. Для выживания перфорированных компетентных клеток необходима богатая питательными веществами изотоническая среда.

На финальной стадии трансформации используют бульон Ханахана с добавлением 0,4 % декстрозы. Декстроза служит источником углерода и энергии, необходимых для восстановления повреждений клеток и последующей репликации.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Принцип действия и интерпретация

Трансформация представляет собой процесс поглощения клеткой чужеродного генетического материала, который при последующей рекомбинации приводит к генетическому изменению клетки.

Способность бактерии поглощать экзогенную ДНК из внеклеточной среды называется компетентностью. Для формирования компетентности важны факторы, влияющие на поверхность клетки, прежде всего изменения проницаемости мембраны, позволяющие чужеродной ДНК проникать в клетку-реципиент.

Бактерии, подвергшиеся трансформации, необходимо культивировать на богатой изотонической среде для восстановления после процесса трансформации. Такая среда способствует устранению повреждений клеточной оболочки, вызванных трансформацией, и последующей репликации клеток.

Бульон Ханахана используют для культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli, прошедших трансформацию. Ферментативный гидролизат казеина и дрожжевой экстракт поставляют азотистые соединения и факторы роста для рекомбинантных клеток E. coli. Хлориды калия и натрия поддерживают изотонические условия. Сульфат магния является необходимым компонентом для репликации ДНК.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 28,08 г сухой гранулированной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам или колбам в требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, ориентировочно 0,103 МПа (около 1,03 бар), при 121 °C в течение 15 мин.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид сухой среды: гранулированная среда кремового или жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: раствор среднего янтарного цвета, прозрачный, без осадка.

Реакция и pH

Реакцию определяют для водного раствора с концентрацией 2,8 % масса/объём при 25 °C.

Реакция: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Сухую среду хранить в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до окончания срока годности, указанного на этикетке.