HiMedia GM1252-500G Среда SOB (бульон Ханахана)

Сухая питательная среда SOB (бульон Ханахана) HiMedia GM1252-500G в гранулированной форме. Применяется для подготовки компетентных клеток и культивирования рекомбинантных штаммов Escherichia coli после трансформации; вес упаковки 500 г.

Принцип работы и интерпретация

Трансформация представляет собой процесс поглощения клеткой чужеродного генетического материала с последующей рекомбинацией, что приводит к генетическому изменению клетки. Способность бактерии поглощать экзогенную ДНК из внеклеточной среды называется компетентностью. Важными факторами компетентности являются изменения проницаемости мембраны, позволяющие чужеродной ДНК проникнуть в реципиентную клетку.

Бактерии, подвергающиеся трансформации, должны культивироваться на богатой изотонической среде, чтобы восстановиться после процесса трансформации, «залечив» перфорации в мембране, и приступить к репликации. Бульон Ханахана (Hanahan's Broth) разработан специально для культивирования таких рекомбинантных штаммов Escherichia coli.

Среда SOB является богатой по питательным веществам и используется при подготовке компетентных клеток. Для генерации компетентных клеток бактерии выращивают в бульоне Ханахана до достижения желаемой мутности, после чего подвергают стандартным процедурам, таким как электропорация или обработка CaCl₂ в охлажденных условиях. Для выживания таких перфорированных компетентных клеток необходима богатая изотоническая среда. На финальной стадии трансформации используется бульон Ханахана с добавлением 0,4 % декстрозы, которая служит источником углерода и энергии для восстановления мембран и последующей репликации.

Роль компонентов:

• Ферментативный гидролизат казеина и экстракт дрожжей: обеспечивают азотсодержащие соединения и факторы роста для рекомбинантных E. coli.
• Хлорид калия и хлорид натрия: поддерживают изотонические условия.
• Сульфат магния: необходимый компонент для репликации ДНК.

Состав

Состав, г/л:

Методика приготовления и стерилизации

1. Растворить 28,08 г среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения компонентов.
3. Разлить среду в пробирки или колбы в соответствии с потребностями.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Контроль качества

• Внешний вид: гранулированная среда от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готового раствора: янтарный, прозрачный раствор без осадка.
• Реакция: pH 2,8 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Технические характеристики

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.