HiMedia GM070I-500G Среда MR-VP

Гранулированная питательная среда HiMedia GM070I-500G Среда MR-VP производства HiMedia предназначена для биохимической идентификации бактерий по реакциям с метиловым красным и Фогес—Проскауэра. Среда применяется для анализа пищевых и молочных образцов, масса упаковки составляет 500 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение и область применения

Среда MR-VP используется для биохимического выявления и дифференциации бактерий по продуктам ферментации углеводов, включая Cronobacter spp., Salmonella, Escherichia coli и колиформные бактерии.

Тип образца: пищевые и молочные продукты.

Методики с использованием среды рекомендованы для:

• биохимического выявления Cronobacter spp. по ISO 22964:2017(E);
• биохимического тестирования Salmonella по руководству FDA BAM;
• биохимического тестирования E. coli и колиформных бактерий по руководству FDA BAM.

Состав

Состав по ISO 22964:2017(E) и FDA BAM

Среда MR-VP, гранулированная, GM0701

*Эквивалентен ферментативному перевару тканей животного происхождения.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 17,0 г среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 10 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип измерения и интерпретация

Реакции с метиловым красным и Фогес—Проскауэра относятся к биохимическим тестам, применяемым для идентификации видов бактерий. Первоначально эти тесты были исследованы Voges и Proskauer, а позднее Clark и Lubs для дифференциации представителей группы коли-аэрогенов.

Обе реакции основаны на выявлении специфических продуктов распада углеводов при метаболизме. Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу.

В бульоне MR-VP после инкубации в течение 18–24 ч ферментация приводит к образованию кислых продуктов метаболизма. Поэтому первоначально все энтеробактерии при проведении теста с метиловым красным дают положительную реакцию.

После дальнейшей инкубации, необходимой для проведения теста — от 2 до 5 суток, — микроорганизмы, положительные по метиловому красному, продолжают продуцировать кислоты. Это приводит к снижению pH до кислых значений, преодолению фосфатной буферной системы и сохранению кислой среды с pH 4,2 или ниже.

Микроорганизмы, отрицательные по метиловому красному, дополнительно метаболизируют первичные продукты ферментации путём декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина). В результате кислотность среды снижается, а pH смещается к нейтральному значению — pH 6,0 или выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетоин и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Бульон MR-VP M070I/GM070I также рекомендован комитетом ISO для биохимического выявления Cronobacter spp. Все типичные виды Salmonella дают положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную реакцию в тесте Фогес—Проскауэра.

Тест с метиловым красным (MR) проводят после 5 суток инкубации при 30 °C. Культуры для теста Фогес—Проскауэра (VP) инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч.

Для проведения VP-теста применяются различные процедуры, предложенные Werkman, OMeara, Levine и соавторами, а также Voughn и соавторами.

Тест Werkman

1. Добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа(III) к 50 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл 10%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Встряхните пробирку для тщательного перемешивания.
4. Устойчивое медное окрашивание, развивающееся в течение нескольких минут, свидетельствует о положительной реакции.

Тест OMeara

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного раствора гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Появление красного окрашивания через несколько минут свидетельствует о положительной реакции.

Модифицированная методика Levine, Epstein и Voughn

Levine, Epstein и Voughn модифицировали методику OMeara, растворив креатин в концентрированном растворе гидроксида калия — реагенте OMeara R031.

Метод Barritt

Voughn, Mitchell и Levine рекомендовали метод Barritt:

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Barritt B R030 — 40%-ного гидроксида калия.
2. Добавьте 3 мл реагента Barritt A R029 — 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле.
3. Положительная реакция определяется по появлению розово-эозинового окрашивания в течение 2–5 мин.

Для исключения ошибочной интерпретации тесты MR и VP не следует использовать как единственный способ дифференциации E. coli от групп Klebsiella—Enterobacter. Известный микроорганизм, положительный по ацетоину, иногда не даёт положительной реакции VP. Для устранения этой вероятности культуру, содержащую реагенты VP, следует осторожно нагреть.

Подготовка, сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в COA, пользователь должен самостоятельно валидировать пригодность среды с учётом специфических требований.
2. Для подтверждения результатов необходимо проводить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: GM070I-500G
• Назначение изделия: среда
• Тип продукта: гранулированный
• Физическая форма: гранулы
• Масса: 500 г
• Материал упаковки: HDPE
• Происхождение компонентов: животного происхождения
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• pH 1,7%-ного водного раствора при 25 °C: 6,70–7,10
• Внешний вид: однородная гранулированная среда кремового или жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка

Контроль качества

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики для GM070I оценивают после инкубации: для теста MR — при 37 °C в течение 48 ± 2 ч; для теста VP — при 37 °C в течение 24 ± 2 ч.