HiMedia GM070I-500G Среда MR-VP

Сухая питательная среда MR-VP HiMedia GM070I-500G для биохимической идентификации бактерий. Применяется для дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae (включая Cronobacter spp., Salmonella и E. coli) по способности к ферментации глюкозы с образованием стабильных кислот или нейтральных продуктов.

Принцип измерения и интерпретация

Определение основано на двух различных тестах: метиловом красном (MR) и Фогеса-Проскауэра (VP), которые позволяют дифференцировать членов группы коли-аэрогенов по продуктам распада углеводов.

Все представители Enterobacteriaceae ферментируют глюкозу. Через 18–24 часа инкубации в бульоне MR-VP образуются кислые метаболиты, поэтому изначально все энтерики дают положительную MR-реакцию. Однако при дальнейшей инкубации (от 2 до 5 дней) происходит следующее:

• MR-положительные организмы продолжают вырабатывать кислоты, что приводит к снижению pH до 4,2 или ниже, преодолевая фосфатную буферную систему среды.
• MR-отрицательные организмы метаболизируют продукты первичной ферментации путем декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина), что снижает кислотность и поднимает pH до 6,0 и выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щелочи нейтральные конечные продукты (ацетоин и 2,3-бутандиол) окисляются до диацетила, который при взаимодействии с креатином дает красный цвет (положительная VP-реакция).

Среда рекомендована комитетом ISO для биохимического обнаружения Cronobacter spp., а также FDA BAM для тестирования Salmonella, E. coli и колиформных бактерий. Типичные виды Salmonella демонстрируют положительную MR-реакцию и отрицательную VP-реакцию.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворите 17,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения.
3. Разлейте по пробиркам по 10 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 psi) в течение 15 минут.

Процедуры тестирования

• Тест метилового красного (MR): выполняется после 5 дней инкубации при 30 °C.
• Тест Фогеса-Проскауэра (VP): культуры инкубируют при 30 °C в течение 24–48 часов.

Варианты проведения VP-теста:

• Метод Веркмана: к 50 мл культуры добавить 2 капли 2 % раствора хлорида железа (III) и 5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Появление устойчивого медного цвета через несколько минут свидетельствует о положительной реакции.
• Метод О'Миры: к 5 мл культуры добавить 25 мг твердого креатина, затем 5 мл концентрированного (40 %) раствора гидроксида натрия. Появление красного цвета после перемешивания через несколько минут — положительная реакция.
• Метод Левина, Эпштейна и Воуна: модификация метода О'Миры, где креатин растворен в концентрированном растворе гидроксида калия.
• Метод Барритта: к 5 мл культуры добавить 1 мл реагента Барритта B (40 % гидроксид калия) и 3 мл реагента Барритта A (5 % $\alpha$-нафтол в абсолютном этаноле). Появление эозиново-розового цвета в течение 2–5 минут указывает на положительный результат.

Примечание: Если известный ацетоин-положительный организм не дает реакции, рекомендуется осторожно нагреть культуру с реагентами.

Технические характеристики

Состав (ISO 22964:2017(E), FDA BAM)

Состав (MR-VP Medium, Granulated® GM0701)

Общие параметры

Контроль качества и эффективность

Внешний вид и pH

• Вид порошка: однородная гранулированная среда от кремового до желтого цвета.
• Вид готового раствора: светло-желтый прозрачный раствор без осадка.
• pH 1,7% водного раствора при 25 °C: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Инкубация: MR-тест при 37 °C в течение 48 ± 2 ч, VP-тест при 37 °C в течение 24 ± 2 ч.

Область применения и ограничения

Тип образцов: пробы пищевых продуктов и молочной продукции.

Ограничения:

• Среда должна быть валидирована пользователем для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA).
• Результаты MR и VP тестов не должны быть единственным основанием для дифференциации E. coli от групп Klebsiella-Enterobacter; необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать крышку во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре +20…+30 °C.
• Требования: хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с образцами и культурами.
• Утилизация: все загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательному автоклавированию или инсинерации перед утилизацией.