Среда для тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра, гранулированная HiMedia GM070-500G (уп/500 гр)

Дифференциальная среда для тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра HiMedia GM070-500G (гранулированная). Применяется для дифференциации бактерий группы coli-aerogenes (энтеробактерий) на основе определения продуктов распада углеводов; поставляется в форме гранул для снижения запыленности и загрязнения рабочих поверхностей.

Принцип измерения и интерпретация

Определение основано на выявлении специфических продуктов метаболизма углеводов. Все представители семейства Enterobacteriaceae являются ферментаторами глюкозы.

1. Тест с метиловым красным (MR): После 18–24 часов инкубации в среде MR-VP образуются кислые метаболиты. При продолжении инкубации (от 2 до 5 суток) MR-положительные организмы продолжают вырабатывать кислоты, что приводит к снижению pH до 4,2 или ниже, преодолевая фосфатную буферную систему. MR-отрицательные организмы метаболизируют продукты ферментации путем декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина), что снижает кислотность и поднимает pH до 6,0 и выше.
2. Тест Фогеса-Проскауэра (VP): В присутствии атмосферного кислорода и щелочи нейтральные конечные продукты (ацетоин и 2,3-бутандиол) окисляются до диацетила, который в реакции с креатином дает красный цвет.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 17,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения.
3. Разлейте по пробиркам по 10 мл (или в другом требуемом объеме).
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Процедуры тестирования

• Тест MR: Выполняется после 5 дней инкубации при 30 °C.
• Тест VP: Культуры инкубируют при 30 °C в течение 24–48 часов.

Варианты проведения VP-теста:

• Метод Веркмана: К 50 мл культуры добавить 2 капли 2 % раствора хлорида железа (III) и 5 мл 10 % раствора гидроксида натрия. Появление устойчивого медного окрашивания через несколько минут свидетельствует о положительной реакции.
• Метод О'Мара: К 5 мл культуры добавить 25 мг твердого креатина, затем 5 мл концентрированного (40 %) раствора гидроксида натрия. Появление красного цвета после перемешивания через несколько минут — положительная реакция.
• Модификация Левина, Эпштейна и Воуна: Креатин растворяется в концентрированном растворе гидроксида калия.
• Метод Барритта: К 5 мл культуры добавить 1 мл реагента Барритта B (40 % гидроксид калия) и 3 мл реагента Барритта A (5 % $\alpha$-нафтол в абсолютном этаноле). Появление эозиново-розового цвета в течение 2–5 минут указывает на положительный результат.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Дополнительные параметры

• Внешний вид: гранулированная среда от кремового до желтого цвета.
• Цвет и прозрачность готового раствора: светло-желтый, прозрачный, без осадка.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Область применения и образцы

Среда предназначена для работы с изолированными микроорганизмами из следующих типов проб:

• Клинические образцы.
• Пробы пищевых продуктов и молочной продукции.
• Пробы воды.

Контроль качества (Культуральные характеристики)

Характеристики наблюдаются после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 часов.

Ограничения и предостережения

1. Тесты MR и VP не должны использоваться как единственный метод дифференциации E. coli от групп Klebsiella-Enterobacter.
2. В редких случаях известные ацетоин-положительные организмы не дают положительной VP-реакции; для устранения этого эффекта рекомендуется осторожно нагреть культуру с реагентами VP.
3. Только для профессионального использования in vitro.

Условия эксплуатации и хранения

• Сухая среда: Хранить в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C в сухом вентилируемом месте. Из-за высокой гигроскопичности продукта плотно закрывайте флакон во избежание комкования.
• Готовая среда: Хранить при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: Загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию.