Дифференциальная питательная среда для тестов с метиловым красным и Фогеса—Проскауэра, гранулированная HiMedia GM070-500G (уп/500 гр), с конечным значением pH 6,9 ± 0,2 при 25 °C. Среда предназначена для дифференциации энтеробактерий по образованию кислых продуктов ферментации глюкозы и ацетоина; тесты MR и VP не следует использовать как единственный способ различения Escherichia coli и групп Klebsiella—Enterobacter.

Назначение

Среда рекомендована для проведения тестов с метиловым красным (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP) при дифференциации представителей группы коли-аэрогенес.

Тип питательной среды: дифференциальная.
Назначение изделия: среда.
Сертификат: ФСЗ 2009/03705.
Регистрация: зарегистрировано в Министерстве здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных параметров проведения анализа.

По составу среда представляет собой глюкозо-фосфатный забуференный питательный солевой бульон Кларка с пептоном, применяемый в комплексе тестов с метиловым красным и в реакции Фогеса—Проскауэра на ацетоин.

Принцип действия и интерпретация результатов

Тесты с метиловым красным и Фогеса—Проскауэра относятся к биохимическим методам идентификации бактериальных видов и основаны на выявлении продуктов распада углеводов.

Все представители семейства Enterobacteriaceae по определению ферментируют глюкозу. В бульоне MR-VP после инкубации в течение 18–24 ч ферментация приводит к образованию кислых продуктов метаболизма. Поэтому на начальном этапе все энтеробактерии при проведении теста с метиловым красным дают положительную реакцию.

После дальнейшей инкубации, предусмотренной процедурой тестирования в течение 2–5 суток, микроорганизмы, положительные по MR, продолжают продуцировать кислоты. Это приводит к снижению pH до кислых значений, преодолению фосфатной буферной системы и сохранению кислой среды с pH 4,2 или ниже.

Микроорганизмы, отрицательные по MR, дополнительно метаболизируют первоначальные продукты ферментации путём декарбоксилирования с образованием нейтрального ацетилметилкарбинола (ацетоина). В результате кислотность среды снижается, а pH смещается к нейтральному значению — до pH 6,0 или выше.

В присутствии атмосферного кислорода и щёлочи нейтральные конечные продукты — ацетоин и 2,3-бутандиол — окисляются до диацетила. Диацетил реагирует с креатином с образованием красного окрашивания.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 17,0 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам порциями по 10 мл или в требуемом объёме.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Методика проведения тестов MR и VP

Тест с метиловым красным

Тест MR проводят после инкубации культуры в течение 5 суток при 30 °C.

Тест Фогеса—Проскауэра

Культуры для теста VP инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч.

Производитель приводит несколько вариантов проведения реакции VP.

Метод Веркмана

1. К 50 мл культуры добавьте 2 капли 2%-ного раствора хлорида железа(III).
2. Добавьте 5 мл 10%-ного гидроксида натрия.
3. Тщательно перемешайте содержимое пробирки.
4. Устойчивая медная окраска, развивающаяся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Метод О’Миры

1. К 5 мл культуры добавьте 25 мг твёрдого креатина.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-ного гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Красное окрашивание, развивающееся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Модифицированный метод О’Миры

Левин, Эпштейн и Вон модифицировали метод О’Миры, растворив креатин в концентрированном растворе гидроксида калия — реагенте О’Миры R031.

Метод Барритта

1. К 5 мл культуры добавьте 1 мл реагента Барритта B — R030, 40%-ного гидроксида калия.
2. Добавьте 3 мл реагента Барритта A — R029, 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле.
3. Положительная реакция определяется по появлению розовой эозиновой или красной окраски в течение 2–5 мин.

Типы исследуемых образцов

• Изолированные микроорганизмы из клинических образцов.
• Образцы пищевой продукции и молочных продуктов.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

• Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.
• Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативам.
• Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с пробами согласно установленным руководствам.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

Форма выпуска: гранулированный кремовый сухой порошок с высокой гигроскопичностью.
Масса упаковки: 0,5 кг.
Упаковка: непрозрачный водоотталкивающий пластиковый флакон с навинчивающимся колпачком и внутренней крышкой.

Внешний вид и свойства приготовленной среды

• Цвет сухой среды: от кремового до жёлтого.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-жёлтый прозрачный раствор без осадка.
• Конечное значение pH: 6,9 ± 0,2 при 25 °C.
• Реакция: реакция 1,7%-ного водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH по контролю качества: 6,70–7,10.
• Гигроскопичность: высокая; при неправильном хранении возможно образование комков.

Контроль качества

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 30–32 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее вид назывался Enterobacter aerogenes.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытой упаковке, в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После вскрытия: хранить в сухом виде, плотно закрывая флакон после каждого использования.
• Приготовленная среда: